[发明专利]同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素的时间分辨荧光试剂盒

权利要求书

1.同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：包括免疫层析时间分辨荧光试纸条和含有铕标记的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体、铕标记的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体、铕标记的抗杂色曲霉素单克隆抗体的样品反应瓶，所述的免疫层析时间分辨荧光试纸条包括衬板，衬板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫于连接处交相接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下横向设有质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，检测线位于质控线下方，个数为三条，检测线上分别包被有二乙酸镳草镰刀菌烯醇-牛血清白蛋白偶联物、黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物和杂色曲霉素-牛血清白蛋白偶联物；所述的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体为由保藏编号为CCTCC NO:C201881的杂交瘤细胞株DAS5G11E7分泌产生。

2. 根据权利要求1所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201013 的杂交瘤细胞株1C11分泌产生；抗杂色曲霉素单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C2013187 的杂交瘤细胞株ST03分泌产生。

3. 根据权利要求1所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述铕标记的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备方法如下：按照铕标记试剂与抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体的质量比为1:0.04~0.3的比例加入抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体，置于摇床中震荡2~4 h，离心后弃尽上清，封闭掉铕标记试剂表面多余结合位点，得到铕标记抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体的目标产物；

所述铕标记的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备方法如下：按照铕标记试剂与抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体质量比为1:0.04~0.3的比例加入适量抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体，置于摇床中震荡2~4h，经离心后弃尽上清，封闭掉铕标记试剂表面多余结合位点，得到铕标记抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的目标产物；

所述铕标记的抗杂色曲霉素单克隆抗体的制备方法如下：按照铕标记试剂与抗杂色曲霉素单克隆抗体质量比为1:0.04~0.3的比例加入适量抗杂色曲霉素单克隆抗体，置于摇床中震荡2~4 h，经离心后弃尽上清，封闭掉铕标记试剂表面多余结合位点，得到铕标记抗杂色曲霉素单克隆抗体的目标产物。

4. 根据权利要求3所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述封闭用封闭液为含有0.5~1%BSA 的硼酸缓冲液；

铕标记试剂使用前进行活化，所述的活化为：用硼酸缓冲液与铕标记试剂以体积比计为4：1-10：1的比例混匀，加入碳二亚胺EDC溶液振荡活化15~30 min，经10000~15000 rpm离心后，以硼酸缓冲液复溶，混匀，超声处理。

5. 根据权利要求1所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述时间分辨荧光免疫层析试纸条规格如下：吸水垫的长为15~35 mm，宽为3~5 mm；样品垫的长为12~18 mm，宽为2~5 mm，相邻各垫交叠的长度为1~3 mm；检测垫上靠近质控线的检测线与硝酸纤维素膜上沿的距离为15~20 mm，相邻检测线之间的距离为1.5~4.5 mm，靠近质控线的检测线与质控线的间距为5~10 mm；

所述样品反应瓶为1~5 mL卡口瓶。

6. 根据权利要求1所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述时间分辨荧光免疫层析试纸条的检测线上二乙酸镳草镰刀菌烯醇-牛血清白蛋白偶联物包被量为0.02-0.8 μg/cm，黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物的包被量为0.01-0.8 μg/cm，杂色曲霉素-牛血清白蛋白偶联物的包被量为0.01-0.8 μg/cm；所述样品反应瓶中铕标记的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体冻干品的含量为5-20 μg，抗黄曲霉毒素单克隆抗体冻干品的含量为5-20 μg，抗杂色曲霉素单克隆抗体冻干品的含量为5-20 μg。

7. 根据权利要求1所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：还包括样品稀释液，即体积分数为0.01%~0.30%吐温-20、0.5~1.5%蔗糖和0.1~1% 牛血清蛋白水溶液。