[发明专利]一种人工密码子优化的猪瘟病毒E2蛋白及其制备方法与用途

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及一种人工密码子优化的猪瘟病毒E2蛋白制备方法与用途。本发明通过优化与合成可猪瘟病毒E2蛋白编码基因，利用人工合成核苷酸序列构建表达载体。获得的优化猪瘟病毒E2蛋白可用于制备猪瘟亚单位疫苗及制备猪瘟诊断试剂盒。

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及一种人工密码子优化的猪瘟病毒E2蛋白及其制备方法与用途。本发明通过优化与合成可猪瘟病毒E2蛋白编码基因，利用人工合成核苷酸序列构建表达载体。获得的优化猪瘟病毒E2蛋白可用于制备猪瘟亚单位疫苗及制备猪瘟诊断试剂盒。

背景技术

据资料记载，猪瘟(Classical swine fever，CSF)又称猪霍乱(Hog cholera)，是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起的一种急性、高热、接触性传染病，是严重威胁猪健康的重要传染病之一。据记载，猪瘟最早流行在19世纪的美国，随后迅速在世界范围内传播，给世界养猪业造成了严重的经济损失。1984年猪瘟被世界卫生组织(OIE)列为A类传染病，在中国也被列为一类传染病。面对严重危害养猪业的猪瘟疫情，世界各国纷纷不断完善有效的诊断方法和防控技术，猪瘟得以控制。在欧洲的一些国家，经过严格的控制与预防，猪瘟疫情已经达到完全消灭的态势。但是近些年来，猪瘟由早期的急性感染转变为慢性或非典型的症状呈现，这给猪瘟的防治带来极大的挑战。为应对猪瘟疫情越来越严峻的考验，针对猪瘟疫苗的研发及血清抗体诊断方法的建立已引起本领域研究人员的关注，这对世界范围内猪瘟疾病的诊断与防控具有重要意义。

CSFV属于病毒界黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivims)，是单股正链RNA病毒，其基因组编码4个结构蛋白和8个非结构蛋白，其中，4个结构蛋白分别为C、E0、E1和E2，其中C蛋白为衣壳蛋白，其余为囊膜糖蛋白；研究显示，所述囊膜蛋白E0、E1和E2在病毒的脱衣壳与入核阶段起到重要作用，C蛋白在维持病毒核酸稳定起到关键作用。

研究显示，结构蛋白在诱导宿主产生保护性免疫中也起到重要作用，C蛋白可以激活宿主的细胞介导的免疫反应，蛋白不能诱导机体产生中和性抗体，E0蛋白与病毒的毒力相关，其抗体可以阻断病毒对细胞的感染，E2蛋白是CSFV主要保护性抗原蛋白，能激活宿主产生保护性免疫，诱导产生抗CSFV中和抗体，因此，E2蛋白一直作为研制CSFV新型疫苗和血清抗体检测的首选靶蛋白。

研究公开了E2蛋白上分布着5个N-糖基化位点，这些糖基化位点在激活宿主保护性免疫中起到重要的作用；。此外，E2能够形成同源二聚体或者与E1形成异源二聚体，其空间结构包含3个疏水区和3个N端链内二硫键；因此，E2蛋白正确糖基化不仅对于E2蛋白结构的稳定起到关键作用，也对激活宿主免疫功能起到重要作用。目前，重组E2蛋白的制备多采用原核表达系统，虽然原核表达系统操作简单，产量高，但由于细菌不能进行糖基化修饰，原核表达系统制备的重组的E2蛋白不能激活宿主的保护性免疫。有研究利用杆状病毒在昆虫细胞表达系统中可以制备重组E2蛋白，昆虫表达系统虽然可以进行蛋白的糖基化修饰，但由于猪病病毒是感染哺乳细胞，E2的糖基化修饰与昆虫细胞的糖基化修饰具有一定的差别，会导致E2蛋白结构和功能与天然蛋白具有一定的差异。有报道关于哺乳细胞表达系统用于猪瘟E2蛋白制备，但由于产量低，制备成本高，难以用于实际生产。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供制备高产量的糖基化猪瘟病毒E2蛋白，不仅可以用于猪瘟的诊断，也可用于猪瘟亚单位疫苗的开发；具体涉及一种人工密码子优化的猪瘟病毒E2蛋白制备方法与用途

发明内容

本发明的目的在于基于现有技术的现状，提供制备高产量的糖基化猪瘟病毒E2蛋白及其方法，具体涉及一种人工密码子优化的猪瘟病毒E2蛋白制备方法与用途，制备的猪瘟病毒E2蛋白不仅可以用于猪瘟的诊断，也可用于猪瘟亚单位疫苗的开发。

本发明提供了一种优化的猪瘟病毒E2蛋白及其编码基因，产生本发明的基因序列的方法不受特别的限制。