[发明专利]高水溶性苯基乙酸酯化合物及包含该化合物的羧酸酯酶检测试剂盒

说明书

本发明涉及羧酸酯酶检测技术领域，具体涉及一种高水溶性苯基乙酸酯化合物及该化合物的制备方法。本发明还涉及包含该化合物的羧酸酯酶检测试剂盒以及使用该羧酸酯酶检测试剂盒对待测样品中的羧酸酯酶进行定性和定量检测的方法。本发明的羧酸酯酶检测试剂盒中的苯基乙酸酯化合物具有高水溶性，并具有近红外荧光发射波长，可用荧光光谱法检测，背景信号较低，背景噪音少。本发明的羧酸酯酶检测试剂盒适于检测成分复杂的生物样品中的羧酸酯酶，还适合于监测活体样本中羧酸酯酶的分布。

技术领域

本发明属于羧酸酯酶检测技术领域，具体涉及高水溶性苯基乙酸酯化合物及包含该化合物的羧酸酯酶检测试剂盒。

背景技术

羧酸酯酶(carboxylesterase，CXE)是一类广泛存在于动植物及微生物中具有α/β折叠结构域的水解酶类，能有效地催化酯类和酰胺类化合物水解，与多种药物、环境毒物及致癌物的解毒和代谢有关，并参与脂质运输和代谢。另外，肝微粒体羧酸酯酶与特定致癌物的代谢及肝癌的发生相关。基于羧酸酯酶的重要生理作用，检测羧酸酯酶及其活性对许多动植物生理过程的研究及药物的疗效评价具有非常重要的科学意义和实际应用价值。

目前，用于羧酸酯酶检测的方法有高效液相色谱、质谱与气相色谱联用、化学发光法、荧光法等。荧光法因其具有简便性、较高的灵敏度和高时空分辨能力等特点而得到了广泛的应用。但是，荧光法的建立也存在一些难点，许多生物体及其组织在可见光的激发下自身会发射荧光，严重干扰生物样品的荧光检测和成像，故使得荧光分析的灵敏度和准确性受到了很大的影响，大部分探针存在稳定性差，波长短，无法适应于活体成像等缺点。近红外荧光探针的最大吸收波长和发射波长为600nm～900nm，光渗透组织可达数厘米，具有优良的生物组织穿透能力与抵抗背景干扰能力，能够减少对活体的损伤，在生物样本检测中已显示出其独特的优越性。然而，近红外荧光母体又受到水溶性，稳定性的限制，不能很好的将其应用到活体检测中。因此发展一种高水溶性的近红外荧光探针用于检测羧酸酯酶，进而应用到活体检测具有非常重要的意义。

中国专利申请CN201710199944.X公开了一种用于检测羧酸酯酶的增强型荧光探针及其制备方法和应用，该探针能够避免外界的干扰，提高检测的精确度，但是这种方法波长在可见光波段，很多样品组成较为复杂，尤其是对于生物组织或者活体组织的检测，这种检测荧光探针无法适用。中国专利申请CN201810129535.7公开了一种羧酸酯酶的荧光探针及其制备方法和应用，该探针能够延长细胞和组织中检测羧酸酯酶的激发波长800nm，降低对细胞和组织的光损伤，增加组织的穿透深度和成像深度。但是，所合成探针需要用二甲基亚砜进行溶解，进而进行各种检测，该探针水溶性受到限制。

综上所述，目前本领域急需发展一种高水溶性的近红外荧光探针、以及利用该探针对羧酸酯酶进行检测的新方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明以三碳菁IR-783骨架为荧光母体，以4-(氯甲基)苯基乙酸酯作为特异性响应基团，设计合成了一种高水溶性的可在近红外发射波长范围内检测羧酸酯酶的化合物，并利用该化合物实现了羧酸酯酶的有效检测。具体而言，本发明的目的是通过如下方面实现的：

在第一方面，本发明提供了一种式(I)所示的高水溶性苯基乙酸酯化合物，

在第二方面，本发明了提供式(I)所示的高水溶性苯基乙酸酯化合物的制备方法，所述方法包括如下步骤：

步骤(A)：在碱存在的条件下，式(IV)所示的化合物与式(V)所示的化合物经取代分解重排反应，得到式(II)所示的化合物；

步骤(B)：在碱存在的条件下，式(II)所示的化合物与式(III)所示的化合物发生亲核取代反应，得到式(I)所示高水溶性苯基乙酸酯化合物，