[发明专利]一种鉴定或辅助鉴定待测天麻为红天麻、乌天麻还是红乌杂交天麻的方法

权利要求书

1.引物组合，包括引物对W291和引物对H255；

引物对W291由引物W291-F和引物W291-R组成；

引物W291-F的核苷酸序列如SEQ ID No：2所示；

引物W291-R的核苷酸序列如SEQ ID No：3所示；

引物对H255由引物H255-F和引物H255-R组成；

引物H255-F的核苷酸序列如SEQ ID No：5所示；

引物H255-R的核苷酸序列如SEQ ID No：6所示。

2.权利要求1所述引物组合的应用，为如下a1）-a4）中的任一种：

a1）鉴定或辅助鉴定待测天麻为红天麻、乌天麻还是红乌杂交天麻；

a2）鉴定或辅助鉴定待测样品中是否含有红天麻、乌天麻或红乌杂交天麻；

a3）制备用于鉴定或辅助鉴定待测天麻为红天麻、乌天麻还是红乌杂交天麻的试剂盒；

a4）制备用于鉴定或辅助鉴定待测样品中是否含有红天麻、乌天麻或红乌杂交天麻的试剂盒。

3.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒。

4.权利要求3所述试剂盒的应用，为a1）或a2）：

a1）鉴定或辅助鉴定待测天麻为红天麻、乌天麻还是红乌杂交天麻；

a2）鉴定或辅助鉴定待测样品中是否含有红天麻、乌天麻或红乌杂交天麻。

5.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将权利要求1所述引物组合中各个引物分别单独包装的步骤。

6.一种鉴定或辅助鉴定待测天麻为红天麻、乌天麻还是红乌杂交天麻的方法，包括如下步骤：

（r1）以待测天麻的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述引物对W291进行PCR扩增；

（r2）以待测天麻的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述引物对H255进行PCR扩增；

（r3）进行如下判断：如果步骤（r1）能够实现有效扩增且步骤（r2）不能够实现有效扩增，则待测天麻为乌天麻；如果步骤（r2）能够实现有效扩增且步骤（r1）不能够实现有效扩增，则待测天麻为红天麻；如果步骤（r1）能够实现有效扩增且步骤（r2）能够实现有效扩增，则待测天麻为红乌杂交天麻。

7.一种鉴定或辅助鉴定待测样品中是否含有红天麻、乌天麻或红乌杂交天麻的方法，包括如下步骤：

（s1）以待测样品的总DNA为模板，采用权利要求1中所述引物对W291进行PCR扩增；

（s2）以待测样品的总DNA为模板，采用权利要求1中所述引物对H255进行PCR扩增；

（s3）进行如下判断：如果步骤（s1）能够实现有效扩增且步骤（s2）不能够实现有效扩增，则待测样品含有乌天麻；如果步骤（s2）能够实现有效扩增且步骤（s1）不能够实现有效扩增，则待测样品含有红天麻；如果步骤（s1）能够实现有效扩增且步骤（s2）能够实现有效扩增，则待测样品含有红乌杂交天麻。

8.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于：

所述步骤（r1）或所述步骤（s1）中，能够实现有效扩增为PCR扩增产物中含有285-295bp的DNA片段；不能够实现有效扩增为PCR扩增产物中不含有285-295bp的DNA片段；

所述步骤（r2）或所述步骤（s2）中，能够实现有效扩增为PCR扩增产物中含有250-260bp的DNA片段；不能够实现有效扩增为PCR扩增产物中不含有250-260bp的DNA片段。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：

所述285-295bp的DNA片段为291bp的DNA片段；

所述250-260bp的DNA片段为255bp的DNA片段。

10.一种鉴定或辅助鉴定待测天麻为红天麻、乌天麻还是红乌杂交天麻的方法，为分别检测待测天麻基于T617C SNP位点和C692T SNP位点的基因型，然后进行如下判断：

如果待测天麻基于T617C SNP位点的基因型为TT纯合型且基于C692T SNP位点的基因型为CC纯合型，则待测天麻为乌天麻；

如果待测天麻基于T617C SNP位点的基因型为CC纯合型且基于C692T SNP位点的基因型为TT纯合型，则待测天麻为红天麻；

如果待测天麻基于T617C SNP位点的基因型为TC杂合型且基于C692T SNP位点的基因型为CT杂合型，则待测天麻为红乌杂交天麻；

T617C SNP位点为天麻基因组中SEQ ID No：7自5’末端起第617位核苷酸；

C692T SNP位点为天麻基因组中SEQ ID No：7自5’末端起第692位核苷酸。