[发明专利]一种超高效液相色谱-串联质谱检测血清睾酮激素的试剂盒

说明书

本发明提供了一种超高效液相色谱‑串联质谱检测血清睾酮激素的试剂盒，属于激素检测技术领域，所述试剂盒包括标准品溶液、内标溶液、稀释液、萃取液、解离剂、稳定剂、质控品和色谱柱；所述萃取液包括第一萃取液和第二萃取液；所述第一萃取液为乙酸乙酯与正己烷的混合液；所述第二萃取液为正己烷；所述解离剂为0.4～0.6mol/L的乙酸铵水溶液；所述的稳定剂为0.1～0.3mol/L碳酸钠水溶液。采用本发明所述的试剂盒检测睾酮含量的线性范围、检出限、回收率和精密度均满足要求，灵敏度高、特异性强、准确可靠，可应用于临床血清样本中睾酮激素的定量检测。

技术领域

本发明属于激素检测技术领域，尤其涉及一种高效液相色谱-串联质谱检测血清睾酮激素的试剂盒。

背景技术

睾酮是一种类固醇激素，作为内源性激素及同化激素，具有增强肌肉力量、增强免疫力、对抗骨质疏松等功效。血清中睾酮激素的检测在成人及儿科内分泌学和肿瘤学中具有重要的意义。在男性中，睾酮分析主要用于确诊性腺功能低下，还用于评估青春期延迟或性早熟的男孩并监测睾酮治疗的适当性。在女性中，睾酮分析可用于评估雄激素过多症(例如特发性多毛症，先天性肾上腺皮质增生，多囊卵巢综合征和雄激素分泌型卵巢或肾上腺肿瘤)，以及雄激素缺乏症。睾酮在女性和儿童体内的循环浓度非常低(比正常男性低一个数量级)，对于成年女性通常低于0.5ng/mL，儿童和接受抗雄激素治疗的男性，血清中睾酮的含量一般低于0.1ng/mL。因此，要求睾酮激素的检测方法具有高灵敏度。

目前，临床生物样品中内源性激素的测定方法主要采用化学发光免疫法等免疫分析法，但由于免疫分析法中同一抗体可能与多种抗原发生反应，导致其灵敏度与准确度都不足。特别是在儿童和女性的睾酮浓度检测中，免疫分析法结果的准确度与重复性很差。液相色谱串联质谱分析技术因具有高选择性、高准确度和高灵敏度等特点，已经成为了内源性激素检测的重要手段。但目前所开发出来的质谱检测方法的性能仍不足以满足临床检测的需求，对比常规临床质谱分析和检测参考标准的研究表明，方法间的精密度和准确度存在差异，因此，需要开发新的准确性好、灵敏度高基于质谱的通量测量男性、女性和儿童的睾酮激素的检测方法。

对于血清中类固醇激素的准确定量检测而言，前处理至关重要，由于血清中的激素含量较低，前处理过程必须能够从血清基质中高效提取目标物，并在保留、浓缩目标物的前提下去除尽可能多的杂质。在LC-MS/MS分析中，血清基质中的酯类等成分的存在会产生离子抑制，进而降低目标离子的信号响应值。现有的检测方法多数均需要使用不低于500μL的样品量来满足血清样品中目标物的信号响应。因此，需要开发一种适用于低样品量且能高效提取目标物和最大化去除多余杂质的前处理方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于一种样品提取效率高、杂质去除率高、样品使用量低、操作简便的利用高效液相色谱-串联质谱检测血清睾酮激素的试剂盒。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种高效液相色谱-串联质谱检测血清睾酮激素的试剂盒，包括标准品溶液、内标溶液、稀释液、萃取液、解离剂、稳定剂、质控品和色谱柱；

所述萃取液包括第一萃取液和第二萃取液；所述第一萃取液为乙酸乙酯与正己烷的混合液；所述第二萃取液为正己烷；

所述解离剂为0.4～0.6mol/L的乙酸铵水溶液；

所述的稳定剂为0.1～0.3mol/L碳酸钠水溶液。

优选的，所述萃取液中乙酸乙酯与正己烷的体积比为(2.5～3.5):2。

优选的，所述标准品包括第一标准品和第二标准品；所述第一标准品为100ng/mL的睾酮标准溶液；所述第二标准品为10ng/mL的睾酮标准溶液。

优选的，所述内标溶液为包括8000～12000pg/mL睾酮-d3的甲醇溶液。