[发明专利]一种检测组蛋白乙酰转移酶的传感器及制备方法

权利要求书

1.一种检测组蛋白乙酰转移酶传感器的制备方法，其特征在于，该传感器将富含G碱基序列的信号探针(DNAS1)通过Au-S键自组装在电极上，当CuCl₂滴入电极表面时，形成具有金属酶活性的G-Quadruplex-Cu(II)，能产生较强的电化学信号，当存在HAT时，可以催化底物肽乙酰化，生成大量的CoA，将G-Quadruplex-Cu(II)修饰电极浸入反应缓冲液中，由于G-Quadruplex与CoA竞争性结合Cu(II)，使电流信号峰值变弱，实现HAT的定量检测；

具体步骤如下：

(1)金电极处理

1)金电极用氧化铝粉末抛光，得到抛光后的电极；

2)将步骤1)中抛光后的电极浸泡在水虎鱼溶液[V(H₂SO₄)：(30％H₂O₂)＝3：1]中2-20min消除吸附的有机物，并用去离子水彻底清洗；

3)再将步骤2)制备的电极用硝酸浸泡10-30min，然后分别用乙醇和去离子水处理电极2-8min，再用氮气吹干后，将电极浸入硫酸中，用循环伏安法(CV)从0到1.6V进行扫描直到获得稳定的信号；

(2)制备DNA自组装电极

1)将步骤1制备成功的金电极浸入DNA固定缓冲液中冲洗电极三次，其中，DNA固定缓冲液包含1-3μM的DNAS1(SEQ.ID.NO1,5′-TGGGTAGGGC GGGTTGGGTTTTTT-3′)，95℃加热后，冷却至室温，制得浸泡电极；

2)用含有0.5-2mMMCH的水溶液处理步骤(2)-1)中的准备电极10-30分钟，避免非特异性吸附，再用10μL含50μMCuCl₂的溶液滴加在上述电极表面孵育90分钟，制得孵育电极；

3)用Tris-HCl(10mM)和去离子水冲洗步骤(2)-2)制得的孵育电极，去除多余的CuCl₂，用氮气吹干，即可制得DNA自组装电极；

(3)HAT活性测定

1)将含不同浓度p300,500μMAc-CoA,200μM底物肽的1×反应缓冲液(pH值7.4)置于20-35℃孵育50-100分钟，得反应缓冲液；

2)将步骤(2)制得的DNA自组装电极浸入步骤(3)-2)反应缓冲液中10-40min，最后用5-20mMTris-HCl冲洗电极，即可制得检测组蛋白乙酰转移酶的传感器，可用于组蛋白乙酰转移酶的电化学检测。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)金电极处理中：

所述金电极的直径为3.0mm；

所述硝酸具体为50％的硝酸；

所述硫酸的浓度为0.5M。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)制备DNA自组装电极中：

所述DNAS1的浓度为2μM；

所述MCH的浓度为1mM；

所述的用MCH的水溶液处理电极15分钟。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)HAT活性测定中：

所述反应缓冲液为50-200μL；

所述反应缓冲液100μL；

所述反应缓冲液pH为7.4；

所述孵育温度为30℃；

所述孵育时间为80分钟；

所述的制得的DNA自组装电极浸入步骤(3)-2)反应缓冲液中30min；

所述的用Tris-HCl冲洗电极的Tris-HCl浓度为10mM。

5.一种用权利要求1所述的制备方法，所述方法为非疾病治疗的诊断方法，其特征在于，采用传统的三电极系统对CHI660D恒电位器进行电化学检测。