[发明专利]一株具有防病促生功能的橘灰青霉及其菌剂和应用

说明书

本发明涉及一株具有促生作用和广谱防病效果的橘灰青霉菌株及其菌剂，所述橘灰青霉为橘灰青霉(Penicillium aurantiogriseum)44M‑3，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2019768。利用橘灰青霉菌株制备成高孢粉菌剂，使用时将高孢粉用0.05％(v/v)吐温80无菌水重悬，不同浓度的孢子悬浮液蘸根或灌根处理植株根部。本发明的橘灰青霉对多种作物上的病原真菌均有良好抑制作用；橘灰青霉高孢粉悬浮液对玉米、小麦、棉花、芝麻、黄瓜和烟草根部和植株的生长均有促进作用；同时该菌剂具备良好的生物安全性，且生物制剂不会产生抗药性、农药残留、环境污染等化学农药常见问题，对人畜健康、环境友好，符合生态农业，绿色环保的需求。

技术领域

本发明涉及一株能够防治多种病害且具有促生作用的橘灰青霉及其应用，属于微生物技术领域。

背景技术

我国对农作物的病害防治长期依赖化学农药，导致农药过量使用，可能会造成环境污染和食品农药残留，给人类健康带来潜在危害。使用对人体和生态环境无害的微生物制剂及其代谢产物，可以减少化学农药施用，已成为世界范围内的发展方向。生物农药因其具有环境友好、对人畜安全、长效、无残留等优点，在控制病害的发生与蔓延上备受青睐。

目前研究较多的生防微生物是芽孢杆菌、假单胞菌、酵母菌、链霉菌和木霉等。关于青霉菌作为生防菌防治植物病害的报道较少，研究发现淡紫拟青霉菌菌株对棉花枯萎病的发生及蔓延具有一定控制作用；淡紫拟青霉菌株NH-PL-03的胞内、外多糖对尖孢镰刀菌的菌丝生长及孢子萌发均有明显抑制作用。

关于橘灰青霉的报道，主要是将其作为发酵菌株，有研究发现橘灰青霉是豆酱发酵过程中产脂肪酶的优势菌株和产生α-淀粉酶的优势种群，尚未有对橘灰青霉促生防病效果及其应用进行系统研究的报道。

发明内容

本发明提供一株具有促生作用和广谱防病效果的橘灰青霉菌株及其菌剂和应用。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一株具有防病促生功能的橘灰青霉，所述的橘灰青霉为橘灰青霉(Penicilliumaurantiogriseum)44M-3，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：武汉大学保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2019768，保藏日期：2019年09月30日。

一种利用橘灰青霉菌株制备高孢粉菌剂的方法，包括以下步骤：

将橘灰青霉接种于PDA培养基上，在25℃、8h光照/16h黑暗的恒温培养箱中光暗交替培养5-7d，用0.05％(v/v)吐温80无菌水洗脱孢子，形成孢子悬浮液，将PDB培养液分装到300mL的三角瓶中，每瓶分装200mL，每瓶接5mL孢子悬浮液，180r/min，28℃摇床培养4d，作为固体发酵培养的种子液，备用；

称取1500g小麦，蒸馏水浸泡8h后，捞出控水，分装到真菌培养袋中，每袋100g，121℃，灭菌30min；每袋接种10mL种子液，平铺使麦子均匀浸润种子液，置于28℃黑暗恒温培养箱中培养7-10d；

待固体发酵培养基充分产孢时，将固体发酵物平铺到铺有一层无菌纸的搪瓷盘中，盖上一层无菌纸，放置在阳光可照射的玻璃窗前晾5-7d，晾干后，用BFQ100真菌孢子分离器收集孢子粉，形成高孢粉菌剂，高孢粉菌剂中橘灰青霉的孢子含量为1.96×10⁹CFU/g。

所述的PDA培养基：去皮马铃薯200g，切块后放入蒸馏水中煮10min，然后过6层纱布过滤，在滤液中加葡萄糖20g，琼脂15～20g，加蒸馏水定容至1000mL，121℃灭菌30min；

PDB培养液为：去皮马铃薯200g，切块后放入蒸馏水中煮10min，然后过6层纱布过滤，在滤液中加葡萄糖20g，加蒸馏水定容至1000mL，121℃灭菌30min。