[发明专利]一种细胞剥离方法

说明书

本发明提供一种细胞剥离方法，具体涉及医药技术领域，S1、把尼龙毛40至80g放入烧杯中，加入蒸馏水80至160ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸15至20min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后；S2、把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，30至45℃温箱并干燥30～40h；S3、取50ml注射器，并在注射器口配置设有夹头的橡胶管，将尼龙毛装入注射器内，然后将注射器用锡箔纸包好，放入灭菌箱内灭菌。S4、往注射器内填入35至40℃的细胞培养液，静置30分钟，将待剥离的细胞液用35至40℃的的培养液稀释成4.9×10⁷个细胞/ml至5.1×10⁷个细胞/ml。S6、将S5中的细胞液倒入注射器内，35至40℃温育50min至70min，离心即T淋巴细胞剥离。本发明可提高T淋巴细胞的剥离效率和剥离质量。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种细胞剥离方法。

背景技术

细胞剥离即细胞分离是生物技术领域常用的实验手段，对于细胞的研究有着不可忽视的作用，其中T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞(胚胎期则来源于卵黄囊和肝)。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。对T细胞进行剥离检测，对人体的健康监测有着举足轻重的作用；现有的T细胞剥离方法，其剥离效率和剥离质量仍有待进一步的提升。

针对上述不足，本发明的目的是提供一种细胞剥离方法，可提高T淋巴细胞的剥离效率和剥离质量。

发明内容

针对上述不足，本发明的目的是提供一种细胞剥离方法，可提高T淋巴细胞的剥离效率和剥离质量。

本发明提供了如下的技术方案：

一种细胞剥离方法，具体步骤如下：S1、把尼龙毛40至80g放入烧杯中，加入蒸馏水80至160ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸15至20min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后，再次把尼龙毛放入烧杯中，重复上述步骤5至7次；

S2、把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，30至45℃温箱并干燥30～40h；

S3、取50ml注射器，并在注射器口配置设有夹头的橡胶管，将尼龙毛装入注射器内，然后将注射器用锡箔纸包好，放入灭菌箱内灭菌。

S4、把注射器固定，往注射器内填入35至40℃的细胞培养液，静置30分钟，然后打开夹头，把细胞培养液放掉，重复上述步骤2至4次。

S5、将待剥离的细胞液用35至40℃的的培养液稀释成4.9×10⁷个细胞/ml至5.1×10⁷个细胞/ml

S6、将S5中的细胞液倒入注射器内，且细胞液液面没过尼龙毛；用锡箔纸包住注射器，35至40℃温育50min至70min。

S7、然后打开橡胶管的夹头，将细胞液收集于离心管中；然后离心即T淋巴细胞剥离。

优选的，S1步骤中，把尼龙毛60g放入烧杯中，加入蒸馏水120ml，用铝箔盖上烧杯并煮沸18min；然后冷却至常温，倒入设有滤纸的漏斗内，把水过滤掉后，再次把尼龙毛放入烧杯中，重复上述步骤6次。

优选的，S2步骤中，把尼龙毛摊在铺有纱布的托盘内，35℃温箱并干燥35h后，使用铝箔将托盘上方盖住

优选的，S4步骤中，把注射器固定，往注射器内填入38℃的细胞培养液，静置30分钟，然后打开夹头，把细胞培养液放掉，重复上述步骤3次