[发明专利]一种利用甲基磺酸乙酯（EMS）构建大麦突变体库的方法

权利要求书

1.一种利用甲基磺酸乙酯构建大麦突变体库的方法，包括以下操作：

1)将饱满的大麦干种子于0.2mol/L的磷酸缓冲液中浸泡1h，浸种期间不断搅拌；浸种结束后取出大麦种子并吸干表面水分；

2)以不同浓度(0.5％、0.7％、0.9％、1.1％)、pH为7.0的甲基磺酸乙酯溶液为诱变处理剂；将100粒大麦种子100ml的诱变处理剂中，于室温条件下恒温振荡处理8～14h进行诱变处理；

3)诱变处理完成后将大麦种子取出并清洗干净，放于铺有滤纸的培养皿中，在26℃培养箱中培养7天；同时以未诱变处理的大麦种子同样处理作为对照；

以胚根的长度不短于种子长度的一半为发芽标准，统计大麦种子的发芽数，并计算发芽率和相对发芽率：

发芽率＝(发芽数/供试种子数)×100％

相对发芽率(％)＝(诱变处理的发芽率/对照的发芽率)×100％；

以相对发芽率在45～55％的诱变处理为最适诱变处理；

4)对5000-10000粒大麦种子，利用最适诱变处理浓度与时间进行EMS诱变处理，诱变结束后就，将种子点播于试验田间，记为M₁代，正常田间管理，种子成熟后分单株收种，收获的种子记为M₂代；

5)M₂代种子并按株系播种定植，每个株系种植多株，在植株整个生长期间调查每个株系的叶、茎、穗子、生育期、育性等的表型变异，对筛选到的所有表型变异植株按单株收种，收获的种子记为M₃代；

6)每个M₃代种子按株系播种定植，每个株系种植多株，在植株生长期间，根据M2代变异株的特点对M₃代株系的突变性状进行重复观测和鉴定；

7)对突变性状能够稳定遗传的M₃代株系按单株收获种子，继续按株系种植，成熟后收获不再分离株系的M₄代种子，所有不再分离株系的M₄代种子构成突变体库。

2.如权利要求1所述的利用甲基甲基磺酸乙酯构建大麦突变体库的方法，其特征在于，所述的大麦种子为“苏啤6号”啤酒大麦的干种子。

3.如权利要求1所述的利用甲基甲基磺酸乙酯构建大麦突变体库的方法，其特征在于，所述的最适诱变处理为：以体积比浓度0.5％、pH为7.0的甲基磺酸乙酯溶液为诱变处理剂；将大麦种子置于100ml的诱变处理剂中，于室温条件下恒温振荡处理14h进行诱变处理。

4.如权利要求1所述的利用甲基甲基磺酸乙酯构建大麦突变体库的方法，其特征在于，所述的最适诱变处理为：以体积比浓度0.9％、pH为7.0的甲基磺酸乙酯溶液为诱变处理剂；将大麦种子置于100ml的诱变处理剂中，于室温条件下恒温振荡处理10h进行诱变处理。