[发明专利]一种检测复发性流产的微缺失或/和微重复的引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒

说明书

本发明提供一种检测复发性流产的微缺失或/和微重复的引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒，涉及生物技术领域，所述引物组合具有如SEQ ID NO.1‑21所示的核苷酸序列，可以被制备成MLPA探针、基因芯片及试剂盒或构建体、重组细胞，还可以作为快速筛选易患复发性流产的生物样品系统的主要部件。本发明提供的引物组合及其应用可以同时检测多个位点的复发性流产微缺失或/和微重复，特异性好，反应灵敏，检测时间短，方法简单、从点突变到大染色体缺失/插入都可以进行检测，成本低廉，临床应用价值高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测易患复发性流产的生物样品的引物组合及其制备的MLPA探针、基因芯片、试剂盒、系统及方法。

背景技术

复发性流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)为妇科常见病理性妊娠，是指连续发生2次或2次以上的自然流产者。研究表明，导致复发性流产的原因很多，其中，遗传因素与复发性流产发生密切相关，其中染色体微缺失和微重复也是遗传因素的常见类型。染色体微缺失/微重复是指染色体上出现长度为1.5kb-10Mb的缺失或重复。尽管每种微缺失或/和微重复综合征发病率都很低，但由于临床检测技术的限制，大量的由于微缺失或/和微重复导致的复发性流产患者在孕前检查和诊断中无法检出，导致患者身心乃至家庭遭受重创和巨大经济负担。因此，如果在备孕期间或胚胎移植前能够检测染色体的微缺失/微重复，将对复发性流产患者具有很重要的意义。

由于妊娠是一个多环节的复杂过程，因此，目前对复发性流产的研究也较多，中国专利文献CN 107177696A通过检测TNF-α、CTLA4、MTHFR三个遗传易感基因对复发性流产进行预防和治疗；中国专利文献CN 103221421A通过对检查非母系样品、特别是从(预期)生物学父亲获得的样品中的人膜联蛋白A5(ANXA5)启动子，或检查从所述女性获得的绒毛膜活检或羊膜穿刺样品中的人膜联蛋白A5(ANXA5)启动子，或在将体外受精胚胎植入所述女性受试者之前，检查从所述体外受精胚胎的桑椹胚期之前或期间获得的单细胞样品中的人膜联蛋白A5(ANXA5)启动子中的某些核苷酸点突变对复发性流产倾向进行检测；中国专利文献CN108486241A通过检测血清mRNA生物标志物实现复发性流产的诊断；中国专利文献CN106987593A通过检测ESR2基因和AR基因的突变判断生物样本是否易患复发性流产。

鉴于导致复发性流产的原因很多，而目前的检测方法不一定能对所有的复发性流产进行检测。而且，目前微缺失/和微重复诊断技术仍存在检出率低、只能进行靶向性诊断等问题，例如主要进行微缺失/和微重复诊断技术中的高分辨率核型分析方法仅能发现少部分较大片段的微缺失异常，荧光原位杂交方法特异性好，但是只能进行靶向性诊断。

发明内容

为解决现有技术中微缺失/和微重复导致的复发性流产检测率低的问题以及使待测生物样品是否为复发性流产生物样本的检测更完善和准确，本发明提供一种可以快速筛选和检测是否为易患复发性流产的生物样品的MLPA探针组合、试剂盒、基因芯片和系统，本发明提供的试剂盒、MLPA探针、基因芯片和系统对待检测的生物样本要求低，方法简单、成本低廉，临床应用价值高。

为实现本发明的技术目的，本发明第一方面提供一种检测复发性流产的生物样品的引物组合，其具有如SEQ ID NO.1-21所示的核苷酸序列。

其中，所述引物组合可以同时对生物样本中的AKT1基因、PDZD2基因的中的微缺失/微重复进行检测，从而筛选待测生物样品是否为易患复发性流产的生物样品。

为实现本发明的技术目的，本发明另一方面提供一种检测复发性流产的生物样品的MLPA探针组合，其具有如SEQ ID NO.1-21所示的核苷酸序列，分别为：

其中，所述每个MLPA探针上具有荧光标记和通用引物。

其中，所述通用引物对依次具有如SEQ ID NO.22-23所示的核苷酸序列。