[发明专利]一种酵素发酵复合菌膜的制备方法

权利要求书

1.一种酵素发酵复合菌膜的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

初发酵：将火龙果果肉原浆自然发酵，富集自然优势菌，获得初发酵液；

分离纯化：分别用孟加拉红琼脂培养基、莫匹罗星锂盐改良MRS琼脂培养基、醋酸菌分离培养基、分离纯化初发酵液中的发酵菌；

扩大培养：将分离纯化得到的菌种分别接种到LB液体培养基中，摇床培养，恒温摇床25～28℃，100～150rpm，培养至OD₆₂₀＝0.8～1.0；

复合菌膜的制备与提取：将培养后的菌种同时接种至火龙果果肉原浆中发酵培养，待发酵液上层形成菌膜后，收集发酵液上层菌膜，离心、干燥，具体为按照1％的接种量将培养后的菌种接种于火龙果果肉原浆中于25～28℃培养3～5天，待发酵液上层形成菌膜二次定殖后，收集发酵液上层菌膜，离心、干燥。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，初发酵步骤中，火龙果果肉原浆自然发酵8～12天。

3.根据权利要求1至2任一项所述的制备方法，其特征在于，所述孟加拉红琼脂培养基包括：蛋白胨5g/L、葡萄糖10g/L、磷酸二氢钾1g/L、无水硫酸镁0.5g/L、孟加拉红0.033g/L、琼脂20g/L、氯霉素0.1g/L。

4.根据权利要求1至2任一项所述的制备方法，其特征在于，所述莫匹罗星锂盐改良MRS琼脂培养基包括：蛋白胨10g/L、牛肉粉5g/L、酵母粉4g/L、葡萄糖20g/L、吐温80 1mL/L、K₂HPO₄·7H₂O2g/L、醋酸钠·3H2O5g/L、柠檬酸三铵2g/L、MgSO₄·7H₂O0.2g/L、MnSO₄·4H₂O0.05g/L、琼脂粉15g/L。

5.根据权利要求1至2任一项所述的制备方法，其特征在于，所述醋酸菌分离培养基包括：酵母膏或酵母粉10g/L、葡萄糖10g/L、碳酸钙20g/L、溴甲酚紫0.015g/L、琼脂粉18g/L。