[发明专利]一种人生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备方法

权利要求书

1.一种人生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括：

步骤1：制备生长抑素免疫原；

步骤2：制备生长抑素多克隆抗体；

步骤3：采用所述步骤1中获得的所述生长抑素免疫原和不完全弗氏佐剂混合，按照第一预设条件对小鼠进行免疫后，获得所述小鼠脾细胞；

步骤4：培养扩增小鼠骨髓瘤细胞，将所述小鼠脾细胞与所述小鼠骨髓瘤细胞按照第二预设条件进行细胞融合，获得杂交瘤细胞；

步骤5：当融合后的杂交瘤细胞满足第三预设条件时，将所述杂交瘤细胞进行培养，获得单克隆抗体，并筛选出中和性单克隆抗体；

步骤6：根据所述步骤5中获得的所述中和性单克隆抗体，制备所述中和性单克隆抗体的免疫原复合物；

步骤7：采用所述步骤5中获得的所述中和性单克隆抗体的免疫原复合物和不完全弗氏佐剂混合，按照第四预设条件对产蛋鸡进行免疫后，获得所述产蛋鸡的生长抑素抗独特型卵黄抗体粗制品；

步骤8：对所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗制品进行纯化，获得所述生长抑素抗独特型卵黄抗体精制品；

步骤9：依次对所述生长抑素抗独特型卵黄抗体精制品进行效价检测、特异性检测、竞争抑制试验、诱导异种动物产生生长抑素抗体试验以及对不同癌细胞株体外抑制作用试验。

2.如权利要求1所述的人生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备方法，其特征在于，在所述步骤2中，所述制备生长抑素多克隆抗体，包括：

将所述步骤1中获得的生长抑素免疫原和不完全弗氏佐剂混合，搅拌均匀后按照第五预设条件对兔或者小鼠外的其他动物进行免疫；

经过第一预设时间后，采集所述兔或者小鼠外的其他动物的血液，离心后获得血清并检测所述血清中生长抑素多克隆抗体的效价，判断所述检测结果是否满足第六预设条件；

当满足所述第六预设条件时，经过第二预设时间后，采集所述动物的血清并获得所述生长抑素多克隆抗体。

3.如权利要求1所述的人生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备方法，其特征在于，在所述步骤3中，还包括：

采用腹腔注射给所述小鼠，每只所述小鼠每次免疫0.2mL，生长抑素含量为10μg，免疫预定次数；

在第二次免疫后，采集所述小鼠的血液，离心获取血清；

当所述血清中的生长抑素抗体效价满足第一预设阈值时，在第三次免疫后获得所述小鼠脾细胞；

制备所述小鼠脾细胞悬液。

4.如权利要求3所述的人生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备方法，其特征在于，在所述步骤4中，包括：

对所述骨髓所述小鼠骨髓瘤细胞进行扩增培养，获得所述小鼠骨髓瘤细胞悬液；

分别采集所述小鼠脾细胞悬液和所述小鼠骨髓瘤细胞悬液各10mL，以及培养液至离心管中，摇匀、离心后去除上清液；

加入体积浓度为50％的融合剂聚乙二醇溶液0.7mL和培养液，离心后去除上清液；

加入20mL的HAT培养液，吹打沉淀细胞，将细胞悬液加入至设有饲养细胞的第一培养板中，每孔加量为0.1mL；

将所述第一培养板置于37℃，CO₂浓度为5％的孵箱中培养。

5.如权利要求1所述的人生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备方法，其特征在于，在所述步骤5中，包括：

采用间接ELISA法对所述杂交瘤细胞进行阳性孔检测，判断所述杂交瘤细胞是否满足第三预设条件；

对满足所述第三预设条件的杂交瘤细胞进行吹打均匀后计数，并进行逐级稀释；

将逐级稀释后的所述杂交瘤细胞在第七预设条件下进行培养，记录单克隆孔，并按照第三预设时间进行阳性检测；

将满足要求的阳性单克隆孔的所述杂交瘤细胞，转至第二培养板中在所述第七预设条件下进行培养增殖后，转入细胞培养瓶中在所述第七预设条件下进行扩大培养；

将呈对数生长的所述杂交瘤细胞收集于离心管中，离心并去除上清液后进行冻存。

6.如权利要求5所述的人生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备方法，其特征在于，所述第七预设条件具体为：

培养液为含20％小牛血清的RPMI-1640培养液，在CO₂孵箱培养，温度为37℃，CO₂浓度为5％。