[发明专利]一种同时检测三种猫易感病毒的定量检测方法及其引物探针组合

说明书

本发明公开了一种同时检测三种猫易感病毒的定量检测方法及其引物探针组合，所述引物探针组合序列分别为FPV‑F、FPV‑R、FPV‑P、FHV‑1‑F、FHV‑1‑R、FHV‑1‑P、FCV‑F、FCV‑R、FCV‑P。本发明提供的多重荧光定量PCR方法同时检测FPV、FHV‑1、FCV三种猫病毒，检测特异性强、敏感性高、操作简便快速，能够在临床样本中快速鉴别诊断猫是否感染上述需检测的病毒，同时能定量监测猫的发病情况，为临床上猫FPV、FHV‑1、FCV病毒的监测、流行病学调查以及这些疾病的防控提供了一种有效的检测手段。

技术领域

本发明属于猫易感病毒定量检测技术领域，具体涉及一种同时检测三种猫易感病毒的定量检测方法及其引物探针组合。

背景技术

随着经济的增长，国民生活水平的提高，我国宠物豢养也日渐兴起，近年来已成为不少人的一种生活时尚。从中国养宠家里宠物拥有量来看，2018年宠物猫数量为6700万只，占宠物数量的30.7％，且还在逐年上升。同时，猫作为实验动物，在医学、生物学等研究领域的应用也越来越广泛，猫的健康也越来越得到重视。目前影响猫科动物健康最常见的三种病毒是猫细小病毒(FPV)、猫疱疹病毒I型(FHV-1)和猫杯状病毒(FCV)。这些病毒常发于幼猫，在临床上往往以混合感染的形式存在且症状难以区分，仅靠肉眼观察难以作出快速鉴别诊断，因此建立能够适用于这些病毒鉴别检测的方法十分重要。

目前检测猫病毒病的方法包括：病毒分离鉴定、血清学检测、ELISA、免疫电镜、常规PCR等。但由于临床上部分患病猫恢复健康会成为无临床症状的病毒携带者，并在机体免疫力下降或应激情况下会不定期向体外排毒，此时做血清学诊断会呈现假阳性结果。因此血清学诊断有一定的局限性。除此之外，病毒分离培养和电镜检查，也因价格昂贵和耗时过长也没能在临床诊断上广泛运用。因此建立一种省时、省力、灵敏、高效的检测的方法迫在眉睫。

基于分子生物技术建立的常规PCR诊断方法自上世纪九十年代开始映入大众视野，因其有着快速、敏感、特异性好的特点，被广泛应用于各种疾病的诊断。虽然其特异性好，检测灵敏度较高，但测定的只是终产物而不是起始模板拷贝数，两者之间没有线性关系。因此不易于定量检测。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

作为本发明其中一个方面，本发明提供一种同时检测三种猫易感病毒的引物探针组合。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种同时检测三种猫易感病毒的引物探针组合，其中：所述引物探针组合序列分别为FPV-F、FPV-R、FPV-P、FHV-1-F、FHV-1-R、FHV-1-P、

FCV-F、FCV-R、FCV-P；所述引物探针组合从5’端至3’端的序列分别为：

FPV-F：cgggggtggtggtggtt；

FPV-R：gcttgagtttgctgtgatttcc；

FPV-P：ctgggggtgtggggatttctacg；

FHV-1-F：gatttgccgcaccatacct；

FHV-1-R：gagtgggaaacagaccagagag；

FHV-1-P：tcttttacattccagactatccacaataacagg；

FCV-F：cgccctacactgtgatgtg；

FCV-R：gagttctgggtagcaacacat；