[发明专利]一种高密度贴壁细胞培养体系的细胞接种方式

权利要求书

1.一种“种子罐”固定床生物反应器的用途，其特征在于，用于制备大规模的细胞种子液，所述固定床生物反应器包括以下元件：

(a)整体封闭而内部多层连通的固定床生物培养空间；(b)物质交换模块，包括培养空间内外气体交换、培养液进出以及消化液添加通道；(c)环境调控模块，包括温度调控元件、Ph调控元件、O₂/CO₂浓度调控元件、和培养液浊度检测传感器；以及任选的(d)搅拌模块和/或(e)监控数据导出模块。

2.如权利要求1所述的用途，所述固定床生物反应器培养空间的内表面积为1-10m²，优选地为3-5m²。

3.一种“种子罐”培养系统，其特征在于，所述培养系统包括以下组件：

(l)如权利要求1所述的固定床生物反应器；(m)一种优化的消化液；以及(n)所述消化液(m)的使用方法。

4.如权利要求3所述的培养系统，所述的培养系统还包括(o)细胞培养液。

5.如权利要求3所述的培养系统，所述的消化液(m)的使用方法，包括以下步骤：

(n1)在固定床生物反应器(l)中培养细胞，当细胞汇合度为60-90％(面积分数)时，放空其中的液体，得到长满细胞的空固定床生物反应器(l)；(n2)往空固定床生物反应器中导入原液体同体积的消化液(m’)；以及(n3)通过固定床生物反应器(l)的培养浊度检测传感器监测，待消化液(m’)出现浑浊后，终止消化，得到细胞种子液。

6.如权利要求5所述的培养系统，所述的细胞在固定床生物反应器(l)中贴壁生长。

7.如权利要求5所述的培养系统，所述的细胞为真核细胞。

8.如权利要求5所述的培养系统，所述的终止消化指把浑浊的细胞悬液(m’)加入完全培养液中。

9.如权利要求8所述的培养系统，所述的消化液(m’)出现浑浊指的是，贴壁细胞被降解后悬浮于细胞悬液内。

10.一种细胞生产体系，其步骤包括以下：

(1)提供种子罐上罐细胞；

(2)将步骤(1)所得的上罐细胞使用如权利要求2所述的培养系统培养，获得细胞种子液；和

(3)将步骤(2)所得的细胞种子液转入扩增管中进行大规模扩增。