[发明专利]蛋白C活性测定试剂盒

说明书

本发明涉及蛋白C活性测定试剂盒，包括：含有蛋白C激活剂的试剂R1和含有发色底物的试剂R2。本发明试剂盒中的试剂R1和试剂R2均为液体，制备工艺简单，成本低，具有显著提升的稳定性和抗血红蛋白干扰效果，可广泛应用于各级医院、卫生部门、医学生物科研单位等机构。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种蛋白C活性测定试剂盒。

背景技术

蛋白C(简称PC)是一种维生素K依赖的血浆丝氨酸蛋白酶酶原，主要在肝脏中合成，肾脏、睾丸中也可以合成一部分，相对分子质量为62kD，半衰期6小时。它在凝血酶或凝血酶-血栓调节蛋白复合物的作用下被转变成活化蛋白C(简称APC)。APC与其辅因子蛋白S(简称PS)形成复合物，有灭活Va和VIIIa及增加纤溶的活性，因此具有抗凝作用。当PC缺乏时，因子Va和VIIIa灭活减少及血循环纤溶能力降低，因此促使纤维蛋白形成过多，而导致血栓形成。

PC在抗凝血、抗炎症、抗细胞凋亡及保护血管内皮细胞等方面都发挥着重要的作用，其众多的生物学功能，决定了其与临床很多疾病都有着密切联系。如脓毒血症、败血症、弥散性血管内凝血(DIC)、血栓性疾病和肝脏疾病，如肝硬化和慢性肝炎等，均可检测到PC水平有不同程度的降低。因此，对PC的测定，对于疾病的预防、监控和治疗有重要作用。由此可见，建立一种能准确检测血浆中PC活性的简便方法，对于上述各类疾病的预防诊断、观察病情及判断预后，具有重要价值。

目前，蛋白C的检测一般可分为2大类：一类是对其抗原含量的检测(PC：Ag)，另一类是对其活性的检测(PC：AC)。

PC：Ag可以用放射免疫分析法、火箭电泳法、酶联免疫吸附法(ELISA)等对PC抗原进行定量分析。火箭电泳法特异性差、敏感性低、且受抗血清制备规模的限制，因而有很大的局限性；放射免疫分析法需要特殊仪器，一般实验室难以进行；因此一般采用特异性较高、较为简便的ELISA法测其含量。

PC：AC的测定可以用活化部分凝血活酶试剂法(APTT)和发色底物法(CSA)。APTT法的测定结果的判定往往以检验人员的经验而定，直接影响测定结果的准确性和重复性。CAS法则因采用较特异性的发色底物，使得操作简便，测定结果的准确性和重复性也较好。

获得性PC缺乏症患者PC：Ag和PC：AC的变化是平行的，因此大多数疾病中测定PC：Ag和PC：AC具有相同的临床意义，一般采用ELISA法或发色底物法(CSA)测定PC：Ag或PC：AC。

世界卫生组织(World Health Orgnization，WHO)推荐的PC检测方法为发色底物法(CSA)。目前，市售的蛋白C活性检测试剂盒也主要采用发色底物法，该方法能准确、特异地反映PC活性，不仅结果真实稳定，而且操作简便易行，具有快速的优点，只需数分钟就能完成检测。

目前市售的蛋白C活性测定试剂盒中所采用的激活剂绝大多数从蝮蛇蛇毒中分离纯化而得。然而，自蝮蛇蛇毒中提取的蛋白C激活剂的稳定性较差，为延长试剂的保存时间，目前市售的蛋白C活性测定试剂盒中，试剂均为冻干粉末。但冻干试剂具有以下弊端：制备工艺繁琐、成本高；试剂的瓶间差异大；实际使用前需要对冻干试剂进行复溶，操作不方便；复溶后的试剂稳定性差，需要在较短时间内完成使用，否则易造成试剂浪费。

因此，本领域亟需一种制备简单、成本更低、稳定性好且使用方便，易于在各级医院、卫生部门等推广使用的液体型蛋白C活性测定试剂盒。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种稳定性好的液体型蛋白C活性测定试剂盒。

在第一方面，本发明提供一种蛋白C活性测定试剂盒，包含试剂R1和试剂R2。试剂R1中包含蛋白C激活剂、缓冲液、聚乙二醇、PC300和醇胺类化合物；试剂R2中包含发色底物和缓冲液。