[发明专利]矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法

说明书

本发明公开了一种矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法，包括S1：将矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型采用盆栽淹水鉴定法，淹水过土面2‑3cm，持续淹水4d，然后对其叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标进行测定、评分；S2：对上述叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标的得分进行加和，确定矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝等级。本发明通过叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标对矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性进行综合鉴定，操作方法简便，鉴定结果准确，有利于筛选耐涝种质资源，为矮牵牛耐涝分子育种奠定了基础。

技术领域

本发明涉及植物栽培与育种技术领域，尤其涉及矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法。

背景技术

矮牵牛(Petunia×hybrida)为茄科多年生草本植物，是重要的园林景观花卉，市场需求量大，涝渍胁迫是制约其生产应用的主要因素。减少涝害的主要途径除通过水利设施降低地下水位外，最根本有效的方法是进行抗逆分子育种，选育耐涝性较好的品种应用于生产。

ERF(Ethylene Responsive Factor)转录因子是植物AP2/ERF转录因子超家族的一个亚家族，广泛参与植物各种逆境胁迫反应的调控，在转基因育种应用中具有巨大潜力。矮牵牛乙烯响应因子PhERF2属于ERF型转录因子VII亚族，与拟南芥AtRAP2.2(Related toApetala2.2)高度同源，现有的研究已证实RAP2.2是拟南芥调控涝渍响应的重要基因。PhERF2作为转录激活因子或转录抑制因子在转录水平激活或抑制靶标基因表达，在植物抗逆反应中起重要作用。ERF转录因子在转基因育种应用中具有巨大的潜力。通过转基因技术改变ERF基因表达水平或ERF蛋白活性有可能获得抗逆性转基因作物新品种或新材料。改变ERF基因后可同时提高抗病性和非生物逆境抗性，表现出广谱性，为通过改变一个ERF转录因子基因的表达或其蛋白活性达到改良多个生物学性状提供可能。前人在矮牵牛的抗热、抗病等方面的研究都取得了一些成就，但对矮牵牛耐涝性的研究却鲜见报道。因此，急需开发一种矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法以利于筛选耐涝种质资源，为矮牵牛耐涝分子育种奠定基础。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的是提供一种矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法，通过叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三个生理指标对矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性进行综合鉴定，操作方法简便，鉴定结果准确，有利于后续矮牵牛种质资源耐涝性评价、耐涝机理研究，并改良和利用耐性种质，为耐性分子育种奠定了基础。

为了实现上述目的，本发明提供的一种矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的耐涝性鉴定方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

S1：将矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型采用盆栽淹水鉴定法，淹水过土面2-3cm，持续淹水4d，然后对其叶绿素，叶片丙二醛含量和根系活力三种生理指标进行测定，各指标的定级范围及得分标准分别为：

(1)叶绿素(a+b)含量指标定级范围及得分标准为：

I级：叶绿素≥1.2mg/g·FW，得5分；

II级：叶绿素1.0～1.2mg/g·FW，得4分；

III级：叶绿素0.9～1.0mg/g·FW，得3分；

IV级：叶绿素0.7～0.9mg/g·FW，得2分；

V级：叶绿素≤0.7mg/g·FW，得1分；

(2)叶片丙二醛含量指标定级范围及得分标准为：

I级：叶片丙二醛≤3μmol/g·FW，得5分；