[发明专利]一种快速检测花生真假杂种的方法在审
| 申请号： | 201911142680.X | 申请日： | 2019-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN111020015A | 公开（公告）日： | 2020-04-17 |
| 发明（设计）人： | 李少雄;洪彦彬;梁炫强;陈小平;温世杰 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院作物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/689 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙) 44288 | 代理人： | 曾令军 |
| 地址： | 510640 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 花生 真假 杂种 方法 | ||
1.一种快速检测花生真假杂种的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)DNA的提取：取花生嫩叶，研磨，加入提取缓冲液混匀，用滤纸条粘取提取液后将滤纸放入洗涤缓冲液洗涤；所述提取缓冲液为含有MEDTA、PVP、NaCl、Tween-20的Tris缓冲液；所述洗涤缓冲液为含有MEDTA、Tween-20的Tris缓冲液；
2)PCR扩增：将洗涤后的液体加入PCR扩增液进行扩增，PCR扩增液包括Taq酶、预混物和特异性SSR引物；
3)PCR扩增产物进行电泳，若含父本特异性带型则为真杂种，否则为假杂种。
2.如权利要求1所述的快速检测花生真假杂种的方法，其特征在于，步骤1)中，花生叶片研磨时间为15-30s。
3.如权利要求1所述的快速检测花生真假杂种的方法，其特征在于，步骤1)中，使用1-2mL的离心管，取花生嫩叶0.01-0.05g，加入1/3-1/2离心管体积的提取缓冲液。
4.如权利要求3所述的快速检测花生真假杂种的方法，其特征在于，步骤1)中，滤纸的宽度为1-3mm，浸入长度为10-15mm。
5.如权利要求3所述的快速检测花生真假杂种的方法，其特征在于，步骤1)中，所述提取缓冲液为含有10mM EDTA、500mM NaCl、3％PVP、1％Tween-20的100mM Tris(pH＝8.0)缓冲液。
6.如权利要求3所述的快速检测花生真假杂种的方法，其特征在于，所述洗涤缓冲液为含有1mMEDTA，0.1％Tween-20的10mM Tris(pH＝8.0)缓冲液。
7.如权利要求6所述的快速检测花生真假杂种的方法，其特征在于，PCR扩增液为25μL体系，包括：0.5μL上游引物、0.5μL下游引物、12.5μL 2XPCRmix和补足25μL的ddH2O。
8.如权利要求1所述的快速检测花生真假杂种的方法，其特征在于，所述特异性SSR引物为：SEQ ID No.1和SEQ ID No.2。
9.如权利要求1所述的快速检测花生真假杂种的方法，其特征在于，所述特异性SSR引物为SEQ ID No.3和SEQ ID No.4。
10.如权利要求1所述的快速检测花生真假杂种的方法，其特征在于，所述特异性SSR引物为SEQ ID No.5和SEQ ID No.6。
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