[发明专利]一种提高中华绒螯蟹抗病性的双链RNA及其应用

说明书

本发明公开了一种提高中华绒螯蟹抗病性的双链RNA及其应用，本发明构建中华绒螯蟹参与天然免疫、细胞增殖、组织生成重要基因EsMMP‑14的RNAi载体，可用于提高中华绒螯蟹的抗病性，具有环境友好的特色和较高的商业应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体来说涉及一种提高中华绒螯蟹抗病性的双链RNA及其应用。

背景技术

基质金属蛋白酶是一种钙离子依赖的含锌离子的内肽酶。由于其内部含有Zn²⁺，活性部位包含金属蛋白酶残基，因此命名为基质金属蛋白酶。MMPs最早是由Gross和Lapier于1962年在蝌蚪断尾时发现的一种能够降解胶原纤维的蛋白酶。随着对MMPs家族研究的深入，被发现的基质金属蛋白酶家族中的成员多达50余种。MMPs家族成员具有多种功能，参与降解细胞与细胞之间的连接、细胞与基底膜之间的连接、降解基底膜和细胞外基质组分，如MMP-1参与细胞质外基质(ECM)的降解；MMP-7能够切割活化TNF-α等促炎因子。基质金属蛋白酶主要存在于细胞质外基质和细胞质内，细胞外基质中的MMPs一部分参与细胞外基质及基底膜组分的水解过程，一部分参与细胞表面上一些受体或信号分子的修饰、活化或信号传递过程，而在细胞质内的MMPs，参与蛋白质降解及其他生理过程。此外，有一小部分MMPs定位在细胞膜上，作为特定配体的受体或信号分子，也参与细胞迁移、血管生成等过程中细胞间通讯识别的分子。由于MMPs参与基底膜的重构过程，近年来主要研究其在哺乳动物肿瘤微环境中的作用和炎症过程中其发挥的功能，如MMP-1参与基底膜和坏死细胞组分的水解，因此在炎症组织中表达量较高；MMP-19参与上皮细胞迁移和新组织生成等过程，可能参与肿瘤形成和迁移过程，并且增强一些MMPs的活性可以增强或抑制肿瘤生长。在哺乳动物的研究中发现MMP-14不仅参与了肿瘤细胞迁移、上皮细胞迁移，还参与肾小管形成、胚胎发育等过程，同时也是一种抗炎因子。MMP-14参与上皮细胞增殖和迁移过程，可能参与了甲壳动物的蜕皮过程，与一些免疫分子相互作用，共同维护甲壳动物健康。这些研究都表明MMPs参与天然免疫、细胞增殖、组织生成等多种生理过程。

研究表明，凡纳滨对虾在感染对虾白斑综合征病毒后，其体内的MMP-2(LvMMP-2)表达量显著上升；此外，脂多糖LPS也可以使LvMMP-2的表达量显著上调。在凡纳滨对虾受到氧化损伤，LvMMP-2的表达水平也有显著提升。提示凡纳滨对虾体内的MMP-2参与其天然免疫及氧化损伤过程。同时，进一步研究发现，凡纳滨对虾原癌基因c-Jun可以增强LvMMP-2的启动子活性，促进其转录；而降低LvMMP-2的表达量，使对虾抗菌肽2(PEN2)和β-防御素的启动子活性显著降低。这些研究都提示MMPs家族参与了甲壳动物的天然免疫过程。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，构建中华绒螯蟹参与天然免疫、细胞增殖、组织生成重要基因EsMMP-14的RNAi载体，可用于提高中华绒螯蟹的抗病性，具有环境友好的特色和较高的商业应用价值。

本发明的第一个方面是提供一种双链RNA，该双链RNA由正义链和反义链组成，正义链核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.1所示序列，反义链核苷酸序列为序列表中SEQ IDNO.2所示序列。

正义链序列：

CUCUAGAUGUUCAACCCUCAGUCCGGCGCUCUGCUCUCCCAAGACAAGCUGAGAGAAAGCAUCAUGGAGUUCCAGGCGUUCGCUGGACUUGAUCAGACGGGUGAACUCGACAACUCGACUCUGGAGAUGAUGAACACCCCGCGUUGUGGCGUCAAGGACAAGGUCGGCUUCGGCACCAGAGCCAGGAGGAAGCGCUAUGCCCUGCAAGGAUCAAGGUGGAGGGUGAAGACUCGAAUUCG

反义链序列：