[发明专利]一种复合物及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种复合物及其制备方法与应用，本发明提供了一种用于降低抗亲和素抗体干扰的复合物，所述复合物包括生物素和亲和素，所述亲和素饱和结合所述生物素。本发明还提供了其制备方法及其在免疫检测中应用。由于部分人体内存在抗链霉亲和素抗体，在体外免疫诊断过程中，该抗体作为内源干扰物会影响检测结果，而本发明提供的复合物可与该抗体结合，从而避免该抗体对检测造成干扰，减少相应的误差或错误，显著提高检测结果的准确性。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种复合物及其制备方法与应用。

背景技术

生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin System，BAS)自70年代末起开始引入酶联免疫、反射免疫和荧光免疫等检测技术中，改善了这些方法的稳定性和特异性，大大提高了方法的灵敏度。为准确、快速检测微量抗原和抗体，开辟了一条新的途径，目前已广泛应用于抗原、抗体的定性、定量检测。

生物素(biotin)发现于20世纪60年代初，广泛存在于动植物体内，尤其是卵黄和肝脏中含量较高。生物素由咪唑酮环和噻吩环组成，与亲和素结合的主要是咪唑酮环，而噻吩环侧链末端的羧基则可结合抗体和其他大分子物质。

亲和素(avidin)又称抗生物素蛋白，最早是从蛋清中提取出的一种碱性糖蛋白。链霉菌(Streptomyces avidinii)分泌的链霉亲和素(streptavidin，SA)是目前常用的一类亲和素，分子量为65kD。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其中每条肽链都能结合一个生物素，并且不带任何糖基，一个链霉亲和素分子能结合4个生物素分子，二者亲和常数(K)亦为10¹⁵mol/L，比抗原与抗体间的亲和力至少高1万倍。链霉亲和素与生物素结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性，而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合，因此，二者结合的产物有较高的稳定性。

人的身体如果感染链霉菌，体内则会产生抗链霉菌的抗体，该抗体的靶蛋白为链霉亲和素蛋白，因此部分人血清中存在抗链霉亲和素的抗体。在体外诊断检测过程中，此抗体会与检测试剂盒中磁珠上偶联的链霉亲和素结合，影响整体检测结果。若干扰抗体结合较多SA-磁珠，由于位阻效应减少了SA-磁珠与生物素抗体结合，导致固相结合物磁珠不能连接人血清中目标抗原，最终检测结果呈假阴性。若干扰物质不仅与SA-磁珠结合，还可以与酶标抗体反应，形成(SA-磁珠—干扰物质—酶标抗体)夹心结构，最终检测结果呈假阳性。因此人血清中抗链霉亲和素抗体的存在严重影响了人体内目标抗原的检测，而现有技术中尚未提出有效的解决办法。现提出消除该物质干扰的解决办法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复合物及其制备方法与应用。

为此，本发明的第一方面，提供了一种用于降低抗亲和素抗体干扰的复合物，所述复合物包括生物素和亲和素，所述亲和素饱和结合所述生物素。

进一步，所述亲和素为链霉亲和素。在具体的实施方式中，在所述复合物中，每个亲和素结合4个所述生物素。

本发明的第二方面，提供了所述复合物的制备方法，包括，使所述亲和素与所述生物素在缓冲液中进行反应，制备得到所述复合物；其中，所述亲和素与所述生物素的摩尔比为1：4-6。

进一步，所述缓冲液的pH为7.0-8.0，例如7.0、7.2、7.4、7.5、7.6、7.8、8.0。

进一步，所述缓冲液为PB、PBS或PBST，所述缓冲液的浓度为10-100mM，例如10mM、20mM、40mM、60mM、80mM、100mM。

进一步，所述反应的温度为25-37℃，优选为37℃。

进一步，所述制备方法还包括，在所述亲和素与所述生物素进行反应后，进行超滤。

进一步，所述超滤采用超滤管进行过滤。