[发明专利]一种通过rs545970来特异性检测少肌症的试剂盒

说明书

本发明公开了一种通过检测rs545970来特异性检测少肌症的试剂盒。该试剂盒包括检测rs545970号SNP位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、用于荧光定量PCR检测的常规组件等。本发明的试剂盒通过同时检测与少肌症遗传易感性密切相关的rs545970上的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体少肌症遗传易感性。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域中SNP分型检测领域，具体涉及一种通过检测rs545970来特异性检测少肌症的试剂盒。

背景技术

少肌症又叫肌肉衰减综合症（Sarcopenia），是一种随年龄增加，以骨骼肌肌纤维质量下降、肌肉力量减小、肌肉耐力及代谢能力下降、结缔组织和脂肪增多等为主要特征的老年慢性代谢性疾病。少肌症往往使老年人的活动能力降低，行走、坐立、登高和提重物等日常动作受影响，逐渐“手无缚鸡之力”。肌肉功能下降，导致老年人意外摔伤的几率升高40%。据统计，50%死于意外的老人，其死因是因为摔倒。少肌症老人患行动不便的风险是同龄老人的2-5倍，严重影响老人的生活质量和自理能力。

少肌症除增加残疾和丧失生活自理能力的风险外，还会促使骨质疏松、关节炎等疾病的发展，它同时也是诱发高血压、糖尿病、高血脂等老年疾病的重要原因。少肌症已成为全球残疾和死亡的主要原因之一。在70岁以下的老年人中有13%-24%患有少肌症，在80岁以上的人群中患病率高达50%甚至更高。与少肌症相关的年度经济损失超过了1000亿美元。

过去有关候选基因的大量研究已经表明，很多基因与人类肌肉量的变化相关。与人体瘦体重指数（LMI）相关的40%以上的基因变异可以产生性状差异。随着分子遗传学的进展，人们发现少肌症是多基因遗传病，许多国家都在开展少肌症的遗传关联研究。至今为止至少已通过分子遗传学手段检出了20个人类基因或染色体区域并被报道与少肌症相关。此外，遗传学和分子流行病学的证据均表明遗传因子涉及决定在特定饮食或用药情况下增加或损失肌肉量的易感性，以及在少肌症患者中发生其它相关疾病的高危险性。目前候选基因已经很多，但是绝大部分都在检测准确性上有待于进一步的提高。

至于检测少肌症基因的方法，目前常规的检测方法包括限制性片段长度多态性法(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)，其原理是当变异影响到某一限制性内切酶的酶切位点时，简单地通过酶切处理患者的PCR产物继而电泳检测是否有变异的方法。但是这种方法存在耗时长，操作繁琐，准确度不高等缺点。也有利用PCR结合DNA测序方法进行基因多态性位点的检测，但是这种方法在大规模人群筛查或检测多个基因多个位点的应用受到一定限制。因此有必要建立一种高通量、高效能、低成本的少肌症易感基因SNP分型方法，以实现临床快速检测或规模化人群筛查。

发明内容

本发明提供了一种通过检测rs545970来特异性检测少肌症的试剂盒。

本发明的目的之一是提供一种少肌症易感基因SNP分子标记的筛选方法，所述方法为通过分析弗雷明汉心脏病研究（FHS）、堪萨斯城骨质疏松研究样本（KCOS）、妇女健康初步计划（WHI）这三个样本的基因组序列以及通过双能X-射线分析仪测量的四肢肌肉含量，发现了分子标记位点rs545970，位置在6号染色体44239677，所述突变为C/G与人的肌肉含量直接相关。

本发明根据NCBI上公开的rs545970分子标记序列提供一种6p21.1染色体上rs545970分子标记的扩增引物对，所述引物对的上游引物：gtcaggatcccagcaggagg；下游引物：catgcttcattctctttgca；扩增片段大小：201 bp。同时提供了一对检测引物对，基因型一荧光探针序列：5’ -FAM- ctagacagcacagaggagggg- TAMRA -3’；基因型二荧光探针序列：5’-VIC- ctagacagcagagaggagggg-TAMRA -3’。