[发明专利]一种用于检测猫杯状病毒和猫细小病毒的组合物、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测猫杯状病毒和猫细小病毒的组合物，其特征在于，所述组合物包括用于检测猫杯状病毒的引物和用于检测猫细小病毒的引物，以及用于检测猫杯状病毒的探针和用于检测猫细小病毒的探针；

其中，所述用于检测猫杯状病毒的引物包括如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所示的序列，所述用于检测猫细小病毒的引物包括如SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4所示的序列；所述用于检测猫杯状病毒的探针包括如SEQ ID NO. 5所示的序列，所述用于检测猫细小病毒的探针包括如SEQ ID NO. 6所示的序列。

2.一种用于检测猫杯状病毒和猫细小病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR反应体系，所述PCR反应体系包括如权利要求1所述的用于检测猫杯状病毒和猫细小病毒的组合物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应体系中的各引物的浓度分别为200~400 nM；各探针的浓度分别为200~400 nM。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应体系还包括PCR反应液和酶混合液，所述PCR反应液包括Mg²⁺、dNTP以及PCR反应缓冲液，所述酶混合液包括逆转录酶、热启动酶混合液以及RNA酶抑制剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应体系中，所述Mg²⁺的浓度为1~2.5 mmol/L；所述dNTP的浓度为0.1~0.25mmol/L；所述PCR反应缓冲液为2×One Step RT-PCR缓冲液；所述逆转录酶的用量为0.5~2 U/反应；所述热启动酶混合液的用量为0.1~0.5U/反应；所述RNA酶抑制剂的用量为1~3 U/反应。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，各引物的用量为0.5 μL，各探针的用量为0.5 μL；所述PCR反应液由10 μL 2×One Step RT-PCR缓冲液、2 μL 25 mM 的MgCl₂、1 μL10 mM的dNTP以及2 μL DEPC-H₂O组成，所述酶混合液由1 μL 40 U/μL的RNA酶抑制剂、1 μL 25 U/μL的逆转录酶和1 μL 5 U/μL的热启动酶混合液组成。

7.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照，所述阳性对照为含有猫杯状病毒和猫细小病毒目的基因序列的重组质粒，所述阴性对照为去离子水。

8.一种如权利要求1所述的组合物在制备检测猫杯状病毒和猫细小病毒的产品中的应用。

9.一种非诊断目的的检测猫杯状病毒和猫细小病毒的方法，其特征在于，所述方法包括：

步骤（1）使用核酸提取试剂提取待检样品中的核酸；

步骤（2）以步骤（1）提取的核酸为模板，采用如权利要求1所述的组合物或采用如权利要求2~7中任一项所述的试剂盒进行RT-PCR反应；

步骤（3）在步骤（2）所述的RT-PCR反应结束后，分析检测结果。