[发明专利]一种富含血小板血浆的制备方法

说明书

本发明公开了一种富含血小板血浆的制备方法，包括如下步骤：采集血样并加入抗凝剂，初步离心并收集上层不含血细胞的液体，以在于初步离心力4～7倍的离心力对液体进行再次离心，吸去上层血浆直到留下的底部液体为血样体积的4％～5％制得富含血小板血浆。本发明制备的PRP浓度是全血中血小板浓度的4‑5倍左右、不含红细胞、重悬均匀也无结块现象，计算收率在77％以上。

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其是涉及一种富含血小板血浆的制备方法。

背景技术

富血小板血浆(PRP)是全血经过离心分离得到的血小板浓缩物，其制备原理是利用血液中各种成分沉降速度不同，通过离心将血液分层。全血经低速离心可分为三层，上层是贫血小板血浆层(PPP)、中间为富血小板血浆层 (PRP)、下层为红细胞层，取中间层可得到高度浓缩的含血小板血浆。一般认为，人体全血中血小板浓度为1～3×10⁵/ml，PRP中的血小板浓度应达到全血血小板浓度的4倍以上，含有的生长因子浓度也应在3倍以上。现有的 PRP制备方法分为一次离心法和二次离心法。公认的一次离心法是Anitua 法，是将10～20ml全血加入5ml含抗凝剂的离心管中，以160g离心6分钟，上层是PPP，下层是红细胞，两层交界处可见一很薄的浅黄色层，即PRP 层；弃去上层(PPP)1ml，吸取剩余上层血浆至下层(红细胞层)1～2mm，得到PRP。用Anitua一次离心法每次能从5ml全血中获取约1.2mlPRP。公认的二次离心法有Landesberg法、Petrungaro法和Aghaloo法，三者的区别是离心力和离心时间的不同。如Landesberg法第一次200g离心10分钟，吸管吸取全部上清液(PPP+PRP)至交界面下3mm，移至另一离心管，平衡后第二次200g离心10分钟，吸取约3/4上清液(PPP)废弃，剩余摇匀即为PRP； Petrungaro法第一次1500g离心6分钟，第二次1000g离心6分钟；Aghaloo法第一次215g离心10分钟，第二次863g离心10分钟。上述三种二次离心法的血小板数与血小板回收率比较可知，Aghaloo法获得的血小板数最多，回收率最高。

目前虽然能制备出浓度达标的PRP，但其技术尚未完全成熟。无论一次离心法还是二次离心法都存在诸多缺点，极大地限制其在实验室和临床的应用。主要表现在：1、在实际操作中，会出现PRP黏连结块的现象，难以垂悬均匀；2、PRP收率不高，一般在55％左右。因此，现有的PRP制备方法仍有待改进。

发明内容

有鉴于此，针对上面常用的分离方法存在的结块和收率低的问题，本发明目的在于提供一种我们提出高收率的富含血小板血浆的制备方法。

本发明的目的是采用如下技术方案实现：

一种富含血小板血浆的制备方法，包括如下步骤：

采集血样并加入抗凝剂，初步离心并收集上层不含血细胞的液体，以在于初步离心力4～7倍的离心力对液体进行再次离心，吸去上层血浆直到留下的底部液体为血样体积的4％～5％制得富含血小板血浆。

可选的，所述抗凝剂选自乙二胺四乙酸或其盐、枸橼酸或其盐、枸橼酸葡萄糖溶液、乙二胺四乙酸或其盐中的至少一种。

可选的，所述抗凝剂为枸橼酸，配制体积浓度为0.109mol/L～ 0.129mol/L，所述抗凝剂与血样的体积比为1：9。

可选的，所述初步离心为200g、8min，所述再次离心为1000g、 10min。

可选的，所述抗凝剂为干粉直接涂在抗凝管内壁或配制成3.2～3.8％浓度的溶液涂在抗凝管内壁待干燥后使用。

可选的，所述采集血样使用离心管或采血袋。

可选的，所述富含血小板血浆中包含1～2.5×10⁹/ml浓度的血小板。

可选的，所述抗凝剂通过富氢水调配而成。