[发明专利]一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺

说明书

本发明公开了一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备；（2）样品溶液的制备；（3）检测波长；（4）标准曲线的制作；（5）回归模型的建立与分析；（6）实验结果分析与优化。本发明提取工艺简单，提取效率高，易于推广应用，应用响应面法优化确定最优因素，保证提取科学性、稳定性，为质量标准研究提供依据。

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺。

背景技术

眼子菜（Potamogeton distinctus A. Bennett J. Bot.）是眼子菜科眼子菜属多年生水生草本植物的全草。俗称水上漂，又称水案板，在全国各稻作区均有分布，为稻田内多年生恶性杂草，主要依靠鸡爪芽（鳞茎）无性繁殖，常年造成危害。在全国第四次中药资源普查中发现眼子菜在贵州分布较广，安顺地区（屯堡人）民族民间用于治疗痔疮和肝炎效果较好。明代兰茂《滇南本草》中记载“牙齿草，又名牙拾草。生田中，味苦、涩，性寒。止赤白痢疾，大肠下血、妇人红崩漏下，恶血”。在《中药大辞典》中记载眼子菜具有清热利水、止血消肿、驱蛔的功效，眼子菜具有利尿、止血、杀虫等药理作用，用于治疗痔疮、蛔虫、水肿等病。前期研究表明眼子菜中含有黄酮类、挥发油类、氨基酸、糖类、鞣质及酚类等成分，其中黄酮类是主要活性物质。目前，国内外没有看到眼子菜提取工艺研究报道。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺，利用响应面法中的等高线和响应曲面进行参数分析，通过多元二次回归方程来拟合响应面值与因素之间函数关系的一种优化统计方法。此方法的优点是可以连续对试验因素的各个水平进行分析。

一种响应面法优化眼子菜总黄酮的提取工艺，包括以下步骤：

（1）对照品溶液的制备：称取 120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品50.9mg，置于烧杯中，加入乙醇溶液，于水浴锅上45℃-55℃溶解，定容至 50 mL 容量瓶中，摇匀，得到1.018mg/mL的芦丁对照溶液；

（2）样品溶液的制备：将眼子菜粉碎，过20-40目筛，称取粗粉 1 g，置于具有瓶塞的锥形瓶中，加入乙醇溶液超声提取，冷却至室温，过滤，加乙醇溶液补足失去的重量，即得眼子菜总黄酮提取液；

（3）检测波长：吸取眼子菜总黄酮提取液5.0 mL 置于50 mL 容量瓶中，加入 5% NaNO₂溶液2.0 mL，摇匀，放置5 min，加入10% Al(NO_３)_３溶液2.0 mL，摇匀，放置5 min，加入4%NaOH溶液10.0 mL，再用乙醇溶液稀释至刻度，静置15 min，在200-800 nm波长处每隔2 nm测定一次吸光度，样品溶液在508 nm处有最大吸收，即为测定波长；

分别吸取芦丁对照品溶液 0 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL 于 25 mL量瓶中，依次加入 5% NaNO₂溶液 2.0mL，摇匀，静置 5min，然后加入 10% Al(NO_３)_３溶液2.0mL，摇匀，静置5min，再加入4%NaOH 溶液 10.0 mL，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15 min，以依次加入上述显色剂的乙醇溶液作为空白对照，于200-800nm进行全波长光谱扫描，在508nm处有最大吸收，故选择测定波长为508 nm；

（4）标准曲线的制作：以吸光度 A 为纵坐标y，浓度 c 为横坐标x，绘制标准曲线，进行线性拟合，得吸光度 A 与浓度 c 的线性回归方程y=0.0052x+0.0046，以及相关系数R²为0.9985；

样品溶液的测定：吸取样品溶液5.0 mL，置于 50 mL 容量瓶中，标准曲线法制备待测溶液，根据芦丁标准曲线求算出总黄酮浓度，根据以下公式计算总黄酮得率。