[发明专利]SYNPO基因甲基化在弱精症诊断剂中的应用及试剂盒

说明书

本发明涉及人SYNPO基因启动子区的甲基化水平在制备检测精子活力的检测剂中的应用，所述人SYNPO基因启动子区位于人5号染色体第149978442至149981142位对应的区域。本发明通过基于全基因组甲基化测序结果进行分析和研究并通过验证，发现人SYNPO基因启动子区的所有甲基化位点是否全部被甲基化在弱精症患者与健康人之间存在着显著性差异，可作为分子标志来诊断受试者是否患有弱精症。当该区域的所有甲基化位点没有全部被甲基化时，受试者患有弱精症的可能性较大。该分子标志可为弱精症的诊断提供辅助评价信息，结合其他诊断指标一起鉴定受试者是否患有弱精症。

技术领域

本发明涉及人类生殖健康领域，更特别地，涉及人SYNPO基因启动子区的甲基化水平在制备弱精症诊断剂中的应用，以及一种弱精症诊断试剂盒。

背景技术

40％以上的不育男性均检测出患有弱精症。弱精症的病因是多因子的，例如，可能与内分泌紊乱、环境因素、生活经历甚至年纪渐长等都密切相关。对鼠类进行基因敲除和突变的研究显示，一些基因的突变与精子活性改变相关，但是这些基因在人类研究中均显示与精子活性无关。尽管近50％的不育案例被认为由遗传缺陷所致，但是，在一些男性不育的案例中，遗传因素貌似并非主要因素。越来越多的证据显示，在男性不育中，异常的表观遗传改变也有贡献。

精子是具有高度多样性的细胞群，其在DNA和精子质量参数上均体现出高度的多样性。有研究者已经开始研究精子DNA甲基化的样品内多样性，包括不同精细胞之间的精子DNA甲基化多样性和同一次射精物中不同质量的精子区之间的精子DNA甲基化多样性。本申请的发明人在研究过程中发现并报道(杜野等，Human Reproduction,Vol.31,No.1pp.24–33,2016，Promoter targeted bisulfite sequencingreveals DNA methylationprofiles associated with low sperm motility in asthenozoospermia)，一些特定区域上的甲基化在弱精症患者的精细胞与正常对照的精细胞之间存在显著的差异，推测其中某些区域的甲基化可能与弱精症的发病相关联。

然而，目前已报道的可作为弱精症的分子标志物的甲基化区域十分少，难以用来准确诊断受试者是否患有弱精症，因此需要鉴定更多与弱精症相关的甲基化区域，从而为后续诊断和治疗的应用提供更多依据。

发明内容

我们在以前研究的基础上，继续深入研究，寻找和分析与弱精有关联的差异甲基化区域。基于此，本发明提供了人SYNPO基因启动子区在制备弱精症诊断剂中的应用。

在一个具体实施方案中，所述人SYNPO基因启动子区位于人第5号染色体第149978442至149981142位对应的区域。

在一个具体实施方案中，所述人SYNPO基因启动子区为如SEQ ID NO:1所示序列对应的区域。

本发明还提供了一种弱精症诊断试剂盒，包括检测人SYNPO基因启动子区的甲基化水平的引物。

在一个优选实施方案中，所述诊断试剂盒包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对由序列分别为SEQ ID NO:2和3的两条引物组成，所述第二引物对由序列分别为SEQ ID NO:4和5的两条引物组成。

在一个优选实施方案中，所述检测试剂盒还包括亚硫酸氢盐溶液。

在一个优选实施方案中，所述亚硫酸氢盐溶液为亚硫酸氢钠溶液。

本发明通过基于全基因组甲基化测序结果进行分析和研究并通过验证，发现人SYNPO基因启动子区的所有甲基化位点是否全部被甲基化在弱精症患者与健康人之间存在着显著性差异，可作为分子标志来诊断受试者是否患有弱精症。当该区域的所有甲基化位点没有全部被甲基化时，受试者患有弱精症的可能性较大。该分子标志可为弱精症的诊断提供辅助评价信息，结合其他诊断指标一起鉴定受试者是否患有弱精症。