[发明专利]一种猪卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种猪卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于，所述猪卵母细胞体外成熟培养液含有雷美替胺。

2.根据权利要求1所述的猪卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于，所述培养液由基础培养液TCM-199，青霉素，链霉素，NaHCO₃，4-羟乙基哌嗪乙磺酸Hepes，聚乙烯醇，丙酮酸钠，胰岛素，半胱氨酸，表皮生长因子，猪卵泡液，孕马血清促性腺激素PMSG，人绒毛膜促性腺激素hCG和雷美替胺组成。

3.根据权利要求2所述的猪卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于，所述卵母细胞体外成熟培养液，以TCM-199为基准计，青霉素的质量浓度为0.048-0.066g/L，链霉素的质量浓度为0.08-0.12g/L，NaHCO₃的浓度为1.95-2mmol/L，Hepes的浓度为9.5-10mmol/L，聚乙烯醇的质量浓度为2.5-3.5g/L，丙酮酸钠的浓度为0.9-0.95mmol/L，胰岛素的质量浓度为8-12ng/mL，半胱氨酸的浓度为0.5-0.7mmol/L，表皮生长因子的质量浓度为8-12ng/mL，猪卵泡液体积浓度为75-125mL/L，PMSG的浓度为8-12IU/mL，hCG的浓度为8-12IU/mL，雷美替胺的浓度为10^-11-10^-7mol/L。

4.根据权利要求3所述的猪卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于，所述卵母细胞体外成熟培养液，以TCM-199为基准计，青霉素的质量浓度为0.06g/L，链霉素的质量浓度为0.1g/L，NaHCO₃的浓度为1.99mmol/L，Hepes的浓度为9.8mmol/L，聚乙烯醇的质量浓度为3g/L，丙酮酸钠的浓度为0.91mmol/L，胰岛素的质量浓度为10ng/mL，半胱氨酸的浓度为0.6mmol/L，表皮生长因子的质量浓度为10ng/mL，猪卵泡液体积浓度为100mL/L，PMSG的浓度为10IU/mL，hCG的浓度为10IU/mL，雷美替胺的浓度为10^-11mol/L。

5.权利要求2-4任一所述的猪卵母细胞体外成熟培养液的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)猪卵泡液的获取：从猪卵巢的卵泡中抽出液体，对所述液体进行离心，保留上清液，对上清液进行过滤除杂，获得猪卵泡液；

(2)将TCM-199，青霉素，链霉素，NaHCO₃，Hepes，聚乙烯醇，丙酮酸钠，胰岛素，半胱氨酸，表皮生长因子，PMSG，hCG，雷美替胺和步骤(1)所获得的猪卵泡液混合，获得培养液粗液；

(3)对步骤(2)所获得的培养液粗液过滤除菌，获得所述的猪卵母细胞体外成熟培养液。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的猪卵巢温度是28-35℃。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的离心是4-6℃条件下，12000-14000r/min，离心30-60min。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的过滤除杂是用0.45μm的滤器进行过滤。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的过滤除菌是用0.22μm的滤器进行过滤。

10.权利要求1-4任一所述的猪卵母细胞体外成熟培养液在体外培养猪卵母细胞上的应用。