[发明专利]α-D-葡萄糖检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种α‑D‑葡萄糖检测试剂盒，属于利用可见光，通过测试反应结果颜色的变化来测试材料的方法。本发明的技术方案是：试剂Ⅱ中仅有变旋酶一种有效组分，葡萄糖色原物及工具酶同在试剂Ⅰ中，由于体液中β‑D‑葡萄糖生成的红色醌亚胺和α‑D‑葡萄糖为β‑D‑葡萄糖生成的红色醌亚胺先后呈色，以试剂Ⅰ反应产生红色醌亚胺为空白，由试剂Ⅱ反应产生的红色醌亚胺计算出α‑D‑葡萄糖的含量，本发明能够检测α‑D‑葡萄糖，使用试剂盒检测时不受内源性β‑D‑葡萄糖影响，是一种快捷、准确性更高的α‑D‑葡萄糖检测方法。

技术领域

本发明属于一种包含酶的测定方法；或是利用可见光，通过测试反应的结果产生颜色变化来测试材料的方法，特别是涉及一种用生化分析仪快捷、准确检测体液中α-D-葡萄糖的测定方法。

背景技术

D-葡萄糖是C原子上的-OH在右边，又名右旋糖，有开链结构和环形结构，有α-及β-异构体，以游离态存在于葡萄、蜂蜜、甜水果、动物的血液、脊髓液和淋巴液等中，又作为多糖的组分及糖甙的形式广存于自然界中，由淀粉水解而得。物理性质为白色结晶性粉末，相对密度1.544(25℃)，α-D-葡萄糖的熔点146℃，[α]D20为 +113.4°,β-D-葡萄糖的熔点148～150℃，[α]D20为 +19.2°。把两者溶液放置时，其[α]D20最后都为 +52.5°。溶于水，微溶于乙醇，甜度约为蔗糖的 70%。化学性质：D-葡萄糖具有一般醛糖的化学性质，在氧化剂作用下，生成葡萄糖酸，葡萄糖二酸或葡萄糖醛酸；在还原剂作用下，生成山梨醇；在弱碱作用下，葡萄糖可与另两种结构相近的六碳糖（果糖和甘露糖）三者之间通过烯醇式相互转化。葡萄糖的分子式为C₆H₁₂O₆，分子中含五个羟基和一个醛基，是己醛糖。其中C-2，C-3，C-4和C-5是不同的手性碳原子，有16个具有旋光性的异构体，D-葡萄糖是其中之一。葡萄糖几乎以环状的半缩醛结构存在，成环后，使原来的羰基碳原子(C-1)变成了手性碳原子，C-1上新形成的半缩醛羟基在空间的排布方式有两种可能。半缩醛羟基与决定单糖构型的羟基(C-5上的羟基)在碳链同侧的叫做α型，在异侧的称为β型。α型和β型是非对映异构体。它们的不同点是C-1上的构型，因此又称为异头物(端基异构体)。它们的熔点和比旋光度都不同葡萄糖的变旋现象，就是由于开链结构与环状结构形成平衡体系过程中的比旋光度变化所引起的。在溶液中α-D-葡萄糖可转变为开链式结构，再由开链结构转变为β-D-葡萄糖;同样β-D-葡萄糖也变转变为开链式结构，再转变为α-D-葡萄糖。经过一段时间后，三种异构体达到平衡，形成一个互变异构平衡体系，其比旋光度亦不再改变。不仅葡萄有变旋现象，凡能形成环状结构的单糖，都会产生变旋现象。α-D-吡喃葡萄糖除C-1上的-OH连在α键上，其它三个碳上的-OH和-CH₂OH都连在e键上，而β-D吡喃葡萄糖C-1上的-OH及所有比较大的原子团(-OH，-CH₂OH)都连在e键上，因而β型的构象更为稳定，如图1所示。故在溶液中达到平衡时，β型占64%，而α型仅占36%。

在实验室葡萄糖测定方法中常用葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法、葡萄糖脱氢酶法，在这些方法中测定的为总葡萄糖含量，包括α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖之和，其中实验室最常用方法为葡萄糖氧化酶法，在测定试剂中含有变旋酶，变旋酶使α-D-葡萄糖转化β-D-葡萄糖，葡萄糖氧化酶将β-D-葡萄糖氧化成D-葡萄糖酸和H₂O₂ ，己糖激酶法可以将α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖同时进行磷酸化，葡萄糖脱氢酶可以将α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖同时进行脱氢反应。