[发明专利]一种间充质干细胞生物学效力的检测方法

权利要求书

1.一种间充质干细胞生物学效力的检测方法，其特征在于，所述方法包括检测间充质干细胞分泌可溶性TNFRI的水平，从而判定间充质干细胞生物学效力，优选地，所述生物学效力为免疫抑制能力。

2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述间充质干细胞为骨髓组织、脂肪组织、脐带组织或胎盘组织来源的间充质干细胞；优选地，所述间充质干细胞为人脐带间充质干细胞。

3.根据权利要求2所述检测方法，其特征在于，所述方法包括检测所述间充质干细胞在体外例如在细胞培养上清液中分泌的可溶性TNFRI；优选地，通过ELISA方法检测不同批次脐带来源间充质干细胞在体外培养上清液中TNFRI的含量。

4.根据权利要求3所述检测方法，其特征在于，所述间充质干细胞的免疫抑制能力与可溶性TNFRI水平正相关；优选地，所述检测方法的判断标准为：每1x10⁶个间充质干细胞在48小时内表达可溶性TNFRI的水平为215pg以上，低于此标准则判定为间充质干细胞生物学效力不合格；更优选地，当细胞培养48小时后，所述间充质干细胞表达可溶性TNFRI的水平为215pg/10⁶细胞以上时，判定其免疫抑制能力大于70％。

5.根据权利要求1-4任一项所述检测方法，其特征在于，在细胞种子库、工作库及注射液的检测及其质量检测标准的制定方面的应用。

6.检测可溶性TNFRI水平的试剂在制备检测间充质干细胞免疫效力的试剂盒的应用；优选地，该检测采用的判断标准为：1x10⁶个间充质干细胞在48小时内表达可溶性TNFRI的水平为215pg以上，低于此标准则判定为间充质干细胞生物学效力不合格。

7.一种对间充质干细胞的生物学效力进行量化的方法，其特征在于，包括：

确定所述间充质干细胞在体外如细胞培养上清液中的TNFRI分泌量；以及基于公式y＝(a+bx)×100％，以便确定所述间充质干细胞生物学效力，优选地，所述生物学效力为免疫抑制能力，

其中，

y为TNF-α抑制率(％)，x为TNFRI分泌量(pg/10⁶细胞)，

a为0.5～0.6之间的常数，优选为0.55465，

b为0.0006～0.0007之间的常数，优选为0.00068。

8.一种确定间充质干细胞生产工艺的方法，其特征在于，包括：

(1)采用候选工艺，从组织中分离、培养间充质干细胞；

(2)利用权利要求7所述的方法对所述间充质干细胞生物学效力进行量化，得到量化结果；以及

(3)基于所述量化结果，确定最终间充质干细胞生产工艺参数；

优选地，在步骤(3)中，当所述间充质干细胞对PBMC分泌的TNF-α抑制率大于等于70％时，则选择所述候选工艺为最终生产工艺；更优选地，当所述TNF-α抑制率小于70％时，则对所述候选工艺进行优化处理，并重复步骤(1)～(2)直至所述TNF-α抑制率大于等于70％；更优选地，所述优化处理包括下列至少之一：1)重新对间充质干细胞的供体来源进行优化筛选；比较不同来源供体获得的细胞TNFRI是否存在差异；2)对间充质干细胞的分离工艺和扩增工艺进行优化，包括优化细胞培养体系和细胞培养条件；3)比较不同冻存和复苏方法对间充质干细胞分泌的TNFRI是否有影响并进行优化。

9.一种生产间充质干细胞的方法，其特征在于，包括：

(a)根据权利要求8所述的方法，确定间充质干细胞生产工艺；

(b)利用步骤(a)中所得到的间充质干细胞生产工艺，采用组织生产间充质干细胞。