[发明专利]离子键自组装制备PEG-P（Asp-AP）-ANTAGOMIR-RNA微球

权利要求书

1.聚（乙二醇）-b-聚[N-（5-氨基戊基）-α,β-天冬酰胺]-ANTAGOMIR-RNA微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将一定量的聚（乙二醇）-b-聚（β-苄基-L-天冬氨酸）（PEG-b-PBLA）溶解在N-甲基吡咯烷酮（NMP）中得到PEG-b-PBLA溶液；

（2）将PEG-b-PBLA溶液逐滴添加到NMP与1,5-二氨基戊烷互溶溶液中，5℃条件下剧烈搅拌1~2小时；随后冰浴条件下使用乙酸中和反应所得混合物，再置于4℃条件下依次用HCl溶液、去离子水透析产物后，冻干，得到PEG-b-P（Asp-AP）；

（3）将PEG-b-P（Asp-AP）和ANTAGOMIR-RNA分别溶解于羟乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）缓冲液中；通过涡旋混合将PEG-b-P（Asp-AP）溶液和ANTAGOMIR-RNA溶液混合均匀，得到前驱基底材料；

（4）将前驱基底材料与溶解在HEPES缓冲液的戊二醛（GA）溶液混合，置于25℃温育25分钟后，用甘氨酸淬灭过量的GA，得到PEG-b-PBLA-ANTAGOMIR-RNA微球。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述聚（乙二醇）-b-聚（β-苄基-L-天冬氨酸）中PEG的分子量Mn为2000~5000g/mol，PBLA的聚合度DP=70~100。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述PEG-b-PBLA与1,5-二氨基戊烷的质量体积比为100mg：2.7mL。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述HCl溶液的浓度为0.01M~0.1M，透析袋截留分子量Mw=3500~4000。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述羟乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）缓冲液的pH值为7.3~7.8之间。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述PEG-b-P（Asp-AP）嵌段共聚物中的氨基与所述ANTAGOMIR-RNA中的磷酸基团的摩尔比为7:5~7:10。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述前驱基底材料中未反应氨基的量与戊二醛的摩尔比为5:2~5:4，其中剩余氨基是通过第（4）步中的投料比在理论中未反应的氨基来确定。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）所述戊二醛（GA）充当交联剂的作用，溶液的浓度为10~15mM，所述甘氨酸的摩尔当量浓度为戊二醛（GA）溶液浓度的10倍。