[发明专利]基于流式细胞术荧光微球双标法快速评价药品/保健品增强免疫力的新方法

权利要求书

1.基于流式细胞术荧光微球双标法快速评价药品/保健品增强免疫力的新方法，其特征在于，方法如下：

1)样品制备：将待测药品/保健品溶于生理盐水中，制成待测样品溶液；将检疫合格的小鼠，随机分为供试品组和正常对照组，供试品组腹腔注射待测样品溶液；末次注射后，按摩各组小鼠腹部，分别吸取腹腔液；

2)制备荧光微球：将荧光微球用质量百分浓度为1％的BSA溶液稀释200-400倍，制备荧光微球BSA溶液，于37℃避光孵育30min后，超声5min；

3)将步骤2)超声后的荧光微球BSA溶液，均匀的分配到6孔板上，每个孔内加入300μl荧光微球BSA溶液，同时加入步骤1)获得的腹腔液1.7ml，上下左右平行移动六孔板，使液体充分混合，然后置于生化培养箱中37℃避光孵育2.5h；将培养后的6孔板取出，弃上清，沿6孔板壁轻轻加入4℃保存的生理盐水1ml洗涤，用生理盐水洗两遍后，加入500μl生理盐水，用细胞刮刮取细胞，用移液枪将含有细胞的生理盐水吸入2ml EP管中，6孔板内再次加入1000μl生理盐水，洗下残留的细胞，合并至刚刚的2ml EP管中，1500rpm/min离心5min，弃去上清，加入100μl生理盐水，并加入F480抗体3μl，混匀，室温避光20min，加入1ml生理盐水，1500rpm/min离心5min，弃去上清，加入300μl生理盐水，混匀，经75μm过滤器过滤，取滤液；

4)将步骤3)获得的滤液上流式细胞仪检测，在荧光微球发射光的荧光通路检测巨噬细胞的荧光强度，每份样品中获取若干个巨噬细胞，数据显示于二维散点图和直方图中，测定未吞噬荧光微球的巨噬细胞和吞噬荧光微球的巨噬细胞的比例。

2.根据权利要求1所述的新方法，其特征在于：步骤1)具体为：样品制备：将待测药品/保健品溶于生理盐水中，制成待测样品溶液；将检疫合格的小鼠，随机分为供试品组和正常对照组，供试品组分别于第一天和第六天腹腔注射待测样品溶液0.2ml/只/次；末次注射后第四天取供试品组和正常对照组小鼠，依次麻醉和消毒后，将小鼠放入紫外灭菌后的超净台，暴露腹腔膜，通过腹腔壁注入3ml生理盐水，按摩小鼠腹部后，分别吸取腹腔液。

3.根据权利要求1所述的新方法，其特征在于：所述荧光微球是羧酸基修饰荧光微球。

4.根据权利要求1所述的新方法，其特征在于：步骤4)中，在荧光微球发射光的荧光通路检测巨噬细胞的荧光强度时，每份样品获取5000个巨噬细胞。