[发明专利]测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法

说明书

本发明公开了测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法。本发明的方法使用高效液相色谱‑质谱联用仪，经加入本底原料建立线性方程，使得本发明所公开的方法时间短，同时控制3种杂质，克服了回收率偏高、高浓度样品污染质谱且影响重复性的技术问题，建立了专属性、灵敏度及准确度符合原料药质量控制需要的可靠方法。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体地，涉及测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法。

背景技术

甲磺司特是1995年日本大鹏药品工业株式会社研制的新型抗过敏药，通过抑制T细胞诱导的白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-5（IL-5）的产生，从而抑制酸性粒细胞的侵润和抑制IgE抗体产生等作用，发挥抗过敏作用。主要用于治疗儿童及成人的支气管哮喘。根据临床表现，甲磺司特可完全或部分替代激素类药物，不仅具有较好疗效、而且具有长期用药安全、方便的特点。

甲磺司特原料药现有合成工艺所用起始物料，多含有脂肪族硝基、单卤代烷烃、磺酸的烷基酯等基因毒性警示结构。根据ICH M7（R1），需将起始物料、中间体、原料药中可能存在的1、2、3类杂质制定在特定限度、可接受限度（TCC）以下或进行细菌突变试验。

发明内容

原料药的制备包括合成甲磺司特的关键中间体，该中间体制备过程如下：

。

该原料药制备过程中可能残留反应的中间体杂质A：1-氯-3-(4-硝基苯氧基)-2-丙醇，对硝基苯酚对化合物D进行亲核开环的杂质B：1,3-二(4-硝基苯氧基)-2-丙醇，化合物E与杂质A亲核取代的杂质C：1-((1-乙氧基-3-(4-硝基苯氧基)-2-丙基)氧基)-3-(4-硝基苯氧基)-2-丙醇，未查到药典、进口注册标准或相关文献报道3种基因毒性杂质在原料药中的检测方法。

为对原料药进行质量控制，本发明提供了一种测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法，对3种基因毒性杂质建立专属性、灵敏度及准确度符合原料药质量控制要求的方法。需要控制的杂质结构分别为：

本发明的测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法，包括如下步骤：

1）使用高效液相色谱-质谱联用仪，并设置参数如下：

色谱柱：C18；

检测器：紫外检测器VWD；

进样盘不控温度；

进样体积20µL；

测试时间：30～60min；

柱温：30～40℃；

波长：220-250nm；

流速：0.2～1.0 ml/min；

流动相：由流动相A和流动相B组成，其中，所述流动相A为0.005～0.010mol/L乙酸铵缓冲盐溶液或0.05～0.1体积%的甲酸水溶液，流动相B为乙腈、或含0.05～0.1体积%甲酸的乙腈混合溶液；进行等度或梯度分离；

采用二维色谱将高浓度的原料药切入废液，同时用第二组泵向质谱泵入清洗流动相；

质谱质量分离器类型：四极杆；

电离方式：电喷雾电离；

毛细管电压：3000～3500V；

干燥气流速：12L/min；

雾化气压力45psig；

碎裂电压：50～100V；

2）溶液配制