[发明专利]用于表达THBS4蛋白的真核表达质粒、构建方法及应用

说明书

本发明涉及一种用于表达THBS4蛋白的真核表达质粒、构建方法及应用，该真核表达质粒含有用于表达THBS4蛋白的基因片段，该用于表达THBS4蛋白的真核表达质粒的构建方法包括以下步骤：对含有THBS4基因的质粒进行双酶切，电泳并胶回收，得到回收产物THBS4目的片段；对pENTER质粒进行双酶切，电泳并胶回收，得到pENTER载体片段；将THBS4目的片段和pENTER载体片段使用T4连接酶进行连接，得到连接产物；将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞并扩大培养，提取质粒即得。可用于THBS4蛋白表达，从而得到纯化的THBS4蛋白，有助于后续MG这类慢性肌肉疾病致病机制的研究的开展并且具有作为疾病生物标志物的潜在功能，为后续辅助患者的精准诊疗提供指导。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种用于表达THBS4蛋白的真核表达质粒、构建、表达方法及应用。

背景技术

血小板反应蛋白-4(Thrombospondin-4，THBS4)分子量为105,869Da，肽链长度为961aa, 人源基因定位在染色体5q14.1[Newton G,Weremowicz S,Morton C C,et al.Thethrombospondin-4 gene.[J].Mammalian Genome,1999,10(10):1010-1016]，存在4个转录本编码两种蛋白质变体，可与肝素和钙结合，具有8个保守结构域：血小板反应蛋白N末端样结构域(TSPN)，钙结合EGF 样结构域(EGF_CA)，血小板反应蛋白3型短重复结构基序(TSP3repeat_short)，血小板反应蛋白3型长重复结构基序(TSP3 repeat_long)，EGF样结构域(EGF)，血小板反应蛋白C 末端区域(TSP_C)，血小板反应蛋白-4的卷曲区域(TSP-4CC)，THBS4属于血小板反应蛋白家族，由五个高度同源的成员组成(THBS1，THBS2，THBS3，THBS4，THBS5)，是介导细胞与细胞和细胞与基质相互作用的粘附糖蛋白[Mosher T M M AF.Biophysical Characterization of the Signature Domains of Thrombospondin-4and Thrombospondin-2[J].Journal of Biological Chemistry,2005, 280(50):41229-3]。THBS4 mRNA在人体中心肌，骨骼肌，肌腱或神经肌肉接头等组织中高表达。