[发明专利]RNase作用底物和RNase污染检测方法及应用

权利要求书

1.一种RNase作用底物，其特征在于，所述RNase作用底物为荧光探针，该荧光探针具有茎环结构，环部的序列长度为3-8bp，茎部的序列长度为3-9bp，5’端和3’端具有0-2bp的不对称碱基；

所述荧光探针的5’端修饰有荧光基团，3’端修饰有淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的RNase作用底物，其特征在于，所述RNase作用底物的序列为如下SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.3任一种：

5’-GCUACCUCAUGGUAGC-3’(SEQ ID NO.1)，其中，环部序列为5’-UCAU-3’；

5’-GCUACCUCAUAGUAGC-3’(SEQ ID NO.2),其中，环部序列为5’-CUCAUA-3’；

5’-UCUCACUGUAUUGAGA-3’(SEQ ID NO.3),其中，环部序列为5’-CUGUAU-3’。

3.根据权利要求1所述的RNase作用底物，其特征在于，所述荧光基团包括FAM、HEX、VIC、ROX或Cy5，优选为FAM；

优选地，所述淬灭基团包括BHQ-0、BHQ-1、BHQ-2或BHQ-3，优选为BHQ-1。

4.根据权利要求1-3任一项所述的RNase作用底物在RNase检测或制备RNase检测的产品中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述RNase检测为RNase活力检测或RNase污染检测；

优选地，所述产品包括试剂或试剂盒。

6.一种RNase污染检测方法，其特征在于，将权利要求1-3任一项所述的RNase作用底物加入待检测样本进行反应，检测反应物中的荧光信号值，根据荧光信号值得到待检测样本中RNase的含量。

7.根据权利要求6所述的RNase污染检测方法，其特征在于，检测反应物中的荧光信号值的方法包括如下a)、b)或c)：

a)荧光定量PCR检测方法检测；

b)RNase作用底物和待检测样本混匀后35-39℃反应25-35min后，微量荧光分光光度计检测；

c)RNase作用底物和待检测样本混匀后35-39℃反应25-35min后，特定光照肉眼可视观察检测。

8.根据权利要求6所述的RNase污染检测方法，其特征在于，还包括构建标准曲线的步骤，将待检测样本的荧光信号值与标准曲线进行比对，得到待检测样本中RNase的含量；

所述标准曲线包括RNase标准品的浓度与RNase标准品荧光信号值的关系。

9.根据权利要求6-8任一项所述的RNase污染检测方法，其特征在于，RNase作用底物的工作浓度为0.1-5μmol/L；

优选地，所述RNase污染检测方法还包括负对照的荧光信号值检测，负对照为无酶水；

优选地，检测标准为待检测样品的荧光信号值比负对照的荧光信号值高2倍以上判定为待检测样品中含有RNase污染。

10.权利要求6-9任一项所述的RNase污染检测方法在比较多个待检测样本中RNase含量或相对含量的应用。