[发明专利]一种具有表观遗传修饰功能腺相关病毒的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201911154776.8 | 申请日： | 2019-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN110863012A | 公开（公告）日： | 2020-03-06 |
| 发明（设计）人： | 谢方;王雪;钱令嘉;王世达;赵云 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N15/57;A61K48/00;A61K38/48;A61P25/28 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 陈波 |
| 地址： | 100039*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 具有 表观 遗传 修饰 功能 相关 病毒 制备 方法 应用 | ||
1.包含一种异源核酸序列的重组单链DNA病毒载体在制备用于治疗应激性认知损伤的药物中的用途，
其中，所述重组单链DNA病毒载体为腺相关病毒载体，所述异源核酸编码治疗性蛋白质。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述治疗性蛋白为TET1(1418-2136aa)，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1-2任一项所述重组单链DNA病毒载体。
4.一种制备权利要求1-2任一项所述重组单链DNA病毒载体的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：含TET1酶催化活性结构域真核表达载体的构建及鉴定；
S2：重组质粒表达检测，将鉴定出的阳性重组质粒转染293T细胞，收集细胞提取蛋白，通过western blot实验检测重组质粒表达情况；
S3：包装腺相关病毒，将重组表达质粒pAAV-TET1(1418-2136aa)和pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293细胞，3天后收集细胞上清和细胞，裂解获得AAV颗粒，通过CsCl密度梯度离心和超滤对病毒进行浓缩和纯化，最后通过real-time PCR检测病毒的滴度。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，步骤S1中，通过PCR获得Tet1酶催化活性结构域的编码基因，再克隆至腺相关表达载体内。
6.根据权利要求4-5任一项所述的制备方法，其中，所述PCR反应所采用的引物序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。
7.根据权利要求4-5所述的制备方法，其特征在于，所述腺相关表达载体为GV467，元件顺序为CMV-betaGlobin-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA。
8.权利要求4-7任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，通过PCR获得的扩增产物翻译产生的肽段为TET1 1418-2136aa，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
9.权利要求1-3任一项所述的病毒载体在针对表观遗传调控机制的研究中以及针对应激所致认知障碍的治疗中的应用。
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