[发明专利]一种测定三磷酸腺苷的电化学发光传感器系统及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种测定三磷酸腺苷的电化学发光传感器系统，其特征在于，所述系统由放大三磷酸腺苷浓度信号的磁性探针Au@Fe₃O₄-substrate-aptazyme、测定Trigger DNA的电化学发光传感器和hairpin-Fc组成；所述磁性探针Au@Fe₃O₄-substrate-aptazyme由Fe₃O₄纳米粒子、金纳米粒子、DNA substrate及aptazyme依次复合而成；所述测定Trigger DNA的电化学发光传感器通过戊二醛交联作用将氨基修饰的Capture DNA 连接至修饰RuSiO₂-CS的工作电极表面得到；

所述hairpin-Fc 序列为TCGTAGCAATACCAGGAGGCTACGATGACTCACTCCTGGTATT-Fc；

所述DNA substrate序列为SH-AAAAAAAAAATTCACCAACTATrAGCTACGATGACTCACCTAGGAG；所述aptazyme序列为“TCATCGTAGAGCGAT CTAGGGGGAGTATTGCGGAGGATAGCACCCATGTTAGTTGGTGAA；所述氨基修饰的Capture DNA序列为NH₂-CTCCTAGGTGAGTCATCGTAGCCTCCTGGTATTG CTACGATGACTCA；

所述磁性探针Au@Fe₃O₄-substrate-aptazyme的制备步骤如下：

（1）称取 FeCl₃及柠檬酸三钠溶解于乙二醇中，加入乙酸钠，搅拌后的混合液加入至反应釜中，反应后沉淀清洗，得到Fe₃O₄纳米粒子；

（2）向HAuCl₄水溶液中加入柠檬酸三钠水溶液，持续煮沸，得到Au纳米粒子；

（3）用APTES对Fe₃O₄纳米粒子进行氨基化修饰，产物与Au纳米粒子混合，磁性分离后清洗，得到Au@Fe₃O₄ 纳米粒子；

（4）Au@Fe₃O₄纳米粒子与DNA substrate混合后，反应后磁性分离后用水清洗，得到Au@Fe₃O₄-substrate溶液；然后与aptazyme混合，过夜反应，得到Au@Fe₃O₄-substrate-aptazyme探针；

所述测定Trigger DNA的电化学发光传感器的制备过程如下：

（1）将工作电极进行抛光后，超声清洗；

（2）取RuSiO₂-CS溶液滴加至上述工作电极表面，室温下静置干燥，清洗晾干；

（3）向上述电极表面滴加戊二醛水溶液，室温反应后清洗晾干；将Capture DNA滴加至电极表面，反应后清洗晾干；

（4）向上述电极表面滴加Blocker，室温反应后清洗晾干，得到测定Trigger DNA的电化学发光传感器。

2.根据权利要求1所述的测定三磷酸腺苷的电化学发光传感器系统，其特征在于，所述Trigger DNA序列为GCTACGATGACTCACCTAGGAG。

3.根据权利要求1所述的测定三磷酸腺苷的电化学发光传感器系统，其特征在于，所述RuSiO₂-CS是由RuSiO₂溶液与含有CS溶液混合得到；所述RuSiO₂为向Triton X-100，环己烷，正己醇的混合液中，加入Ru(bpy)₃Cl₂水溶液，混匀后加入TEOS及氨水，搅拌反应；加入丙酮后进行离心，清洗沉淀得到RuSiO₂。