[发明专利]一种特异性鉴别银耳菌株的SCAR分子标记及其鉴定方法和应用

说明书

本发明提供了一种特异性鉴定银耳菌株的SCAR分子标记及其鉴定方法和应用，SCAR分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，或与SEQ ID NO：1所示序列中前后两端30bp内的中间序列一致，或与SEQ ID NO：1所示序列中前后两端30bp内的中间序列相似度达99％以上。本发明还提供了基于SCAR分子标记设计的引物，利用该SCAR分子标记和引物可对不同银耳品种进行鉴定，能快速有效的鉴定出银耳TWW01‑AX菌株，其具有操作简单、耗时短，特异性强等优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种特异性鉴定银耳菌株的SCAR分子标记及其鉴定方法和应用。

背景技术

银耳(Tremella fuciformis)隶属于银耳目(Tremellales)，银耳科(Tremellaceae)，银耳属(Tremella)，为我国久负盛名的食药用菌。银耳含有多种生物活性物质，可提高机体免疫力、缓解神经系统损伤，具有抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂等功效，拥有广阔的开发前景。

银耳作为我国极具特色优势的食用菌品种，其产量已占全球90％以上。目前，我国银耳主栽品种单一，随着传代次数的增加，主栽品种已出现了不同程度的退化，这给制种工作带来了一定的风险，迫切需要优质新品种的补充。与其它食用菌相比，银耳民间制种混乱，菌种来源争议较大，同名异种、同种异名等问题同样突出。此外，随着栽培规模的进一步扩大，对能够适应不同海拔、不同气候条件的银耳优质栽培菌种的需求也越来越大，因此需要建立简便、快捷、结果准确的菌株鉴定技术，以期保证菌种的使用准确无误，保护育种者及生产者的利益避免科研资源的浪费。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于提供一种特异性鉴定银耳菌株TWW01-AX的SCAR分子标记，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，或与SEQ ID NO：1所示序列中前后两端30bp内的中间序列一致，或与SEQ ID NO：1所示序列中前后两端30bp内的中间序列相似度达99％以上。

在序列合成过程中，因合成体系或程序发生变化，则会导致合成的序列有所差异，但针对本发明，其主要表现在前后两端30bp左右的序列会发生部分碱基的替换、插入或缺失，但只要前后两端30bp左右内的中间序列，即基于SEQ ID NO：1所示序列，该序列中前端30bp左右或后端30bp左右的序列可以发生变化，但这两端的中间片段序列并没有发生变化，或者中间序列相似度达99％以上均在本发明保护范围之内。

上述银耳菌株TWW01-AX已于2019年11月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC NO.18809。

本发明的另一个目的是提供基于上述SCAR分子标记设计的引物，引物序列优选为：

2047-S-1F：5'-GGCGGAGGATACAGATTG-3'；

2047-S-1R：5'-CCAGTAGGTAGCGGAAGA-3'。

本发明的第三个目的是将上述SCAR分子标记或引物用于鉴定银耳菌株TWW01-AX。

采用上述SCAR分子标记或引物鉴定银耳菌株TWW01-AX的方法，包括以下步骤：

提取样品DNA，并对其进行SCAR-PCR扩增，若扩增出308bp的条带，说明样品菌株为银耳菌株TWW01-AX。

上述SCAR-PCR反应体系为：上下游引物各1μL，DNA模板1μL，2×EasyTaq PCRSuperMix 12.5μL，ddH₂O 9.5μL；SCAR-PCR反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，30个循环，72℃延伸10min。

本发明提供的特异性鉴定银耳菌株的SCAR分子标记及其鉴定方法和应用，具有以下有益效果：