[发明专利]一种抑制奇异核桃外植体褐化的培养基与方法

说明书

本发明提供了一种抑制奇异核桃外植体褐化的培养基与方法，所述培养基包括基本培养基、活性炭和苹果酸；所述方法包括：(1)选择外植体并进行预处理；(2)将预处理后的外植体接种于所述的抑制奇异核桃外植体褐化的培养基中于12℃～14℃黑暗条件下培养一段时间后，在光照和暗培养交替进行下培养。本发明提供的抑制奇异核桃外植体褐化的培养基与方法使得其抗褐化率和诱导率大大提高，抗褐化率约为89.92％～95.18％，诱导率约为45.27％～53.62％。

技术领域

本发明涉及苗木无性繁殖技术领域，特别涉及一种抑制奇异核桃外植体褐化的培养基与方法。

背景技术

奇异核桃是美国核桃生产上采用的重要砧木，是以函兹核桃为母本，以核桃为父本通过自然或人工杂交培育而成。用奇异核桃做核桃砧木，不仅树体生长势强壮，而且树体抗黑线病、根颈朽等病害，对根部寄生线虫有较大的耐性。

植物组织培养中外植体变褐死亡是诱导脱分化和再生芽的重大障碍。褐化通常是由于植物组织细胞中的酚类物质被氧化后产生棕褐色的醌类物质，使组织变成褐色。在离体培养过程中，这类物质扩散到培养基中，致使外植体生长受到抑制，以致死亡，导致培养失败。木本植物中核桃细胞中含有较多的单宁类物质，特别是酚类物质，外植体不仅在初代培养中容易褐化而且在继代培养中也易因褐化而死亡，组织培养难度大，外植体褐变死亡是导致培养失败的主要因素。因而，在核桃离体培养中，防止外植体褐变死亡是其能否培养成功的关键所在。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种抑制奇异核桃外植体褐化的培养基与方法，能够显著降低奇异核桃外植体的褐变率。

本发明是这样实现的：

本发明提供的目的之一在于提供一种抑制奇异核桃外植体褐化的培养基，包括基本培养基、活性炭和苹果酸。

优选地，所述抑制奇异核桃外植体褐化的培养基包括10～20mg/L活性炭、15～20mg/L苹果酸。

更为优选地，所述抑制奇异核桃外植体褐化的培养基为基本培养基中添加10～20mg/L活性炭、15～20mg/L苹果酸、30g/L蔗糖和6g/L的琼脂，pH值为5.5～6.0。

具体地，所述基本培养基为WPM基本培养基、DKW基本培养基、MS基本培养基或B5基本培养基。其中基本培养基优先选用DKW基本培养基。

本发明提供的目的之二在于提供一种抑制奇异核桃外植体褐化的方法，具体包括如下步骤：

步骤1、选择外植体并进行预处理；

步骤2、将预处理后的外植体接种于权利要求1-4任一所述的抑制奇异核桃外植体褐化的培养基中于12℃～14℃黑暗条件下培养一段时间后，在光照和暗培养交替进行下培养。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明提供的一种抑制奇异核桃外植体褐化的培养基，在基本培养基中添加活性炭和苹果酸，其抗褐化率和诱导率大大提高；本发明人是实验探索发现：

(1)在基本培养基中加入10～20mg/L活性炭、15～20mg/L苹果酸，抗褐化率约为89.92％～95.18％，诱导率约为45.27％～53.62％；

(2)对比例1(不加活性炭和苹果酸)的抗褐化率和诱导率分别约为21.38％和25.61％；

(3)只加活性炭不加苹果酸的对比例1的抗褐化率和诱导率分别约为46.83％和33.27％；

(4)只加苹果酸不加活性炭的对比例2的抗褐化率和诱导率分别约为42.32％和29.84％；