[发明专利]VEGF165b蛋白在制备肿瘤抑制剂中的应用、肿瘤抑制剂及其制备方法

说明书

本发明涉及VEGF165b蛋白在制备肿瘤抑制剂中的应用、肿瘤抑制剂及其制备方法，属于肿瘤抑制药物技术领域。本发明中的VEGF165b蛋白在制备增强免疫效应细胞杀伤肿瘤细胞的能力的肿瘤抑制剂中的应用，优选为使用VEGF165b蛋白处理NK92细胞，处理后的NK92细胞即为肿瘤抑制剂。VEGF165b能与VEGF165竞争性结合NK92细胞上的VEGFR1受体，使NK92细胞释放的颗粒酶和穿孔素水平升高，进而提高其对癌细胞的杀伤作用。VEGF165b能促进NK92细胞的杀伤作用在以NK92为基础免疫细胞为基础的免疫治疗及抗肿瘤药物制备方面具有很大的应用价值。

技术领域

本发明涉及VEGF165b蛋白在制备肿瘤抑制剂中的应用、肿瘤抑制剂及其制备方法，属于肿瘤抑制药物技术领域。

背景技术

自然杀伤细胞NK（Natural killer，NK）作为机体重要的免疫效应细胞，在健康的人的外周血淋巴细胞中占比为10%左右，其作为机体的第一道防线，在早期实体瘤的发生发展的免疫监视、免疫反应中具有不可或缺的作用，因此，NK细胞被广泛的应用于临床上治疗。NK细胞有着独特的免疫性：（1）NK细胞是非特异性的杀伤，且杀伤作用不被HLA限制，NK细胞表面产生的细胞毒受体，导致分泌穿孔素和颗粒酶B，不产生IL-2，但是会产生IFN-γ、TNF-α等细胞因子；（2）NK细胞表面的CD16 +可产生ADCC的杀伤作用；（3）NK细胞的杀伤作用是连续的，杀死一个再转到另一个，杀死的肿瘤细胞约7-10个；（4）NK细胞寿命短暂，发挥功效后会很快消失，NK细胞治疗患者是有效且安全的。NK92是一种NK细胞系，其具有以下特性：NK92细胞是高度依赖IL-2的；其免疫表型是CD56 + CD16 -，因此不会产生ADCC的效应；能够在体外扩增，且可以长期培养；所以NK92本身或作为嵌合抗原受体（Chimeric AntigenReceptor, CAR）宿主在体内可望被应用于肿瘤的过继性免疫治疗。

在血管生成的研究中，研究最广泛的是VEGFA。VEGFA通过与其受体VEGFR1、VEGFR2和 Nrp1 的相互作用，不仅可以促进肿瘤的生成，还会导致肿瘤诱导引起的免疫耐受。血管内皮生长因子VEGF-A经过mRNA的选择性剪切，可以分为两大类：一类是以VEGFxxx家族为代表的促血管生成因子；另一类是以VEGFxxxb家族为主的抗血管生成因子，VEGF165和VEGF165b就是其中的两个代表。多种实验表明，VEGF165通过抑制DC的成熟、T细胞的增殖及NK细胞活化等途径抑制免疫细胞对癌细胞的杀伤作用。目前，还没有较好的方法提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。

发明内容

本发明的目的是提供VEGF165b蛋白在制备肿瘤抑制剂中的应用，VEGF165b蛋白能够增强免疫效应细胞杀伤肿瘤细胞的能力，因此可以用于制备肿瘤抑制剂。

本发明还提供了一种肿瘤抑制剂。

本发明还提供了肿瘤抑制剂的制备方法。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

VEGF165b在制备增强免疫效应细胞杀伤肿瘤细胞的能力的肿瘤抑制剂中的应用。

具体的，VEGF165b通过与VEGF165的竞争性抑制作用增强免疫效应细胞杀伤肿瘤细胞的能力。

优选的，所述免疫效应细胞自身表达VEGF165而不表达VEGF165b，VEGF165b通过与VEGF165竞争性结合免疫效应细胞上的VEGFR1受体增强免疫效应细胞杀伤肿瘤细胞的能力。

更为优选的，使用VEGF165b蛋白处理NK92细胞，处理后的NK92细胞即为肿瘤抑制剂。