[发明专利]表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201911159887.8 | 申请日： | 2019-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN110904152A | 公开（公告）日： | 2020-03-24 |
| 发明（设计）人： | 童光志;高飞;童武;李国新;姜一峰;郑浩;周艳君;虞凌雪;李丽薇;刘长龙 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心） |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/34;C12N15/40;A61K39/12;A61P31/14;A61P31/20 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 非洲 猪瘟 病毒 p54 蛋白 重组 繁殖 呼吸 综合征 构建 方法 及其 应用 | ||
1.一种表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，所述方法为根据ASFV p54蛋白的编码基因E183L的核苷酸序列以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4-F112的基因序列设计SOE PCR引物，在HuN4-F112的ORF1b和ORF2之前插入ASFV p54蛋白的编码基因E183L的序列，并在外源基因3’端下游插入此病毒的转录调控序列6（TRS6）；将扩增出的嵌合p54蛋白的编码基因片段通过Asc I和EcoR V双酶切，然后回收PCR产物连接到HuN4-F112的Asc I和EcoR V双酶切载体上，从而获得了嵌合重组质粒pA-ASFV-p54。
2.如权利要求1所述的一种表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，所述嵌合重组质粒pA-ASFV-p54是能够稳定表达ASFV p54蛋白的高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112重组病毒。
3.如权利要求1所述的一种表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，所述嵌合重组质粒pA-ASFV-p54的全长序列如SEQ ID NO.7所示。
4.一种利用权利要求1-3之一所述的一种表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法获得的嵌合重组质粒。
5.一种权利要求4所述的嵌合重组质粒的应用，所述应用为作为一种新型的基因工程活载体疫苗用于非洲猪瘟的免疫保护。
6.一种包含非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒或其免疫原性衍生物的疫苗组合物，其中所述表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的嵌合重组质粒pA-ASFV-p54的全长序列如SEQ ID NO.7所示。
7.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其中所述组合物还包含佐剂。
8.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其中所述佐剂选自水包油佐剂、聚合物和水佐剂、油包水佐剂、氢氧化铝佐剂、维生素E佐剂及其组合。
9.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。
10.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其中所述组合物还包含至少一种额外的抗原。
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