[发明专利]口服余甘子鞣质部位后胆汁中指标成分含量测定及30种化学成分分离鉴定方法

说明书

本发明提供一种口服余甘子鞣质部位后胆汁中化学物质的检测方法，包括：胆汁样品采集；胆汁样品预处理；指标性成分没食子酸、柯里拉京、鞣花酸在胆汁中的含量测定方法；和可同时分离鉴定出胆汁中6种原型成分和24种代谢产物的方法。具有分离度好，简便准确，灵敏度高，重现性好，分离鉴定数量多等优点，能够有效评价口服余甘子鞣质部位在胆汁的代谢和排泄规律。

技术领域

本发明涉及一种口服余甘子鞣质部位后化学物质检测方法，特别涉及口服余甘子鞣质部位后胆汁中指标成分含量测定及30种化学成分分离鉴定方法。

背景技术

药物吸收进入体内后，通常经过分布、代谢与排泄过程。药物经体内代谢生成具有活性或产生新的生物活性的代谢产物，有的药物本身无活性，生成具有活性的代谢产物才能发挥药效。如果活性成分的代谢速度快，在体内很快消除，则药物的疗效就很难发挥应有的药效。胆汁排泄是入血成分在体内消除时间长短的重要因素，影响着药物的血药浓度、药效、药效维持时间长短以及是否出现毒性等。研究药物的代谢与排泄规律，对于设计合理给药途径、给药剂量等有重要意义。

余甘子富含鞣质成分，具有抗氧化、抗炎、抗癌和降血糖等生物活性，成为国内外研究的热点。然而截止目前，尚未发现研究口服余甘子鞣质部位后在胆汁中代谢、排泄的相关报道。此外，由于代谢产物的量很少，分离鉴定代谢产物尤其同时分离鉴定多种代谢产物存在困难。因此，需要一种能够有效评价口服余甘子鞣质部位在胆汁的代谢和排泄规律的检测方法。

发明内容

发明目的：本发明提供一种口服余甘子鞣质部位后胆汁中化学物质的检测方法，包括：胆汁样品采集；胆汁样品预处理；指标性成分柯里拉京（corilagin）、鞣花酸（EA）在胆汁中的含量测定方法；和可同时分离鉴定出胆汁中6种原型成分和24种代谢产物的方法。具有分离度好，简便准确，灵敏度高，重现性好，分离鉴定数量多等优点，能够有效评价口服余甘子鞣质部位在胆汁的代谢和排泄规律。

技术方案：

本发明提供了一种口服余甘子鞣质部位后胆汁中化学成分的检测方法，包括：

（1）动物给药与胆汁样品采集；

（2）胆汁样品预处理，包括：

精密吸取大鼠胆汁，加入内标溶液，涡旋混合，加入有机溶剂萃取，离心，取上层有机相，进高效液相色谱仪前过微孔滤膜，记录色谱图；

空白胆汁按同样方法处理；

（3） 指标性成分柯里拉京（corilagin）、鞣花酸（EA）在胆汁中的含量检测，包括：

按步骤（2）方法操作，每个分析批制备一条随行标准曲线，根据随行标准曲线，计算大鼠胆汁样品中corilagin、EA浓度，用浓度乘以胆汁体积后计算不同时间段大鼠胆汁中corilagin、EA的排泄量；

色谱条件：色谱柱为C18色谱柱；和/或柱温 28-32℃；和/或流速：0.8-1.2 ml·min^-1；和/或检测波长：268-272nm；和/或流动相：甲醇 - 0.2 % 冰醋酸/水梯度洗脱：0-15min 5-25%甲醇，15-20min 25-25%甲醇，20-30min 25-30%甲醇，30-60min 30-60%甲醇，60-65min60-90%甲醇，65-70min 90-5%甲醇；

（4）HPLC-MS同时分离鉴定胆汁中原型成分和代谢产物的方法：

动物给药与胆汁样品采集，同步骤（1）；

胆汁样品预处理：同步骤（2）；

色谱条件：同步骤（3）；