[发明专利]一种快速制备流行性传染性支气管炎疫苗的方法

说明书

本发明提供了一种快速制备流行性传染性支气管炎疫苗的方法，所述方法是以传染性支气管炎病毒H120疫苗株的感染性克隆为骨架载体，再将骨架载体中的抗原基因置换为传染性支气管炎流行毒株的目的抗原基因，从而获得重组支气管炎病毒的方法，所述目的抗原基因是不同血清型/基因型的传染性支气管炎流行毒株的S基因片段嵌合而成；所述置换还可以是目的抗原基因与N基因同时置换，置换时均需保留骨架载体中原有的S1基因的信号肽区域。其有益效果在于，本发明所述快速制备流行性传染性支气管炎疫苗的方法，操作方法简单易行，重复性高，传代稳定性好，能快速高效的应对频繁变异的IBV流行，并且所述方法为载体疫苗的构建提供新思路。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及一种快速制备流行性传染性支气管炎疫苗的方法。

背景技术

禽传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触传染性疾病，是国际兽医局(OIE)及我国规定的家禽B/二类传染病之一，以呼吸道症状、肾炎和生产性能下降为特征，尤其是肉鸡发生以肾肿为特征的肾型传支后造成高死亡率，白羽肉鸡死淘率可达到30％以上，优质肉鸡可造成15％左右的死亡率，发病肉鸡的增重和饲料报酬降低，与大肠杆菌、支原体等混合感染引发气囊炎使肉鸡品质下降。蛋雏鸡感染IB，除可引起死亡外，还会造成生殖系统永久非可逆损伤，表现为输卵管和卵巢发育不良，或输卵管、子宫大量积水囊肿，造成假母鸡，表现为无产蛋高峰，产蛋数量与产蛋质量下降、产白壳蛋、软壳蛋、纱皮蛋和崎形蛋。部分IBV毒株还可以引起肠道、腺胃、肌肉的病变。IB对各个日龄、各个品种鸡群都可造成危害，给全球养禽业造成巨大的经济损失，是严重影响世界养禽业的重大传染病之一。

目前，禽传染性支气管炎的防控主要以疫苗为主，市场上疫苗主要分为：1)灭活苗：灭活疫苗不能在体内复制，所以它们不可能毒力反强并导致病理损伤，诱导的免疫应答持续期较短，并且仅诱导抗体产生，而不能介导T细胞的免疫应答。因此，使用灭活疫苗免疫时需要大剂量的佐剂和多次疫苗接种，这可能增加疫苗生产成本，从而限制了它们的推广应用。灭活疫苗必须注射接种，这种方式在大规模养禽环境中难以实施甚至是不可行的。同样，注射部位的不良反应问题也可能导致胴体价值降低。2)弱毒活苗：制备过程费时费力；存在体内突变、重组、毒力反强风险；母源抗体中和，降低疫苗应答重组DNA疫苗，某些需要有效的载体递送；制备时技术严苛；翻译后蛋白修饰可能改变蛋白免疫原性。

但20世纪90年代以来，IB仍然在国内相继爆发，且流行十分广泛，给养禽业带来巨大经济损失。原因在于IBV在宿主细胞内复制的过程中，由于RNA聚合酶(RDRP)缺乏校对功能和低保真性，其基因组在复制过程中十分容易发生点突变、插入和缺失，特别是S1基因上点突变很可能造成中和抗原位点的改变，导致新的血清型、基因型的产生。因此IBV防控的难点在于血清型、基因型众多，且不同血清型、基因型间没有交叉保护或者交叉保护很弱。

发明内容

本发明克服了传统弱毒疫苗研制过程中需要耗时耗力分离纯化病毒、连续传代致弱病毒存在不确定以及田间应用时毒力返强等问题，避免了成本高、生产周期长以及有可能污染外源病毒等缺点，提供一种针对流行传染性支气管炎的时效性强、拯救效率高，且快速制备重组病毒疫苗的方法，所述方法是以传染性支气管炎病毒H120疫苗株的感染性克隆为骨架载体，再将骨架载体中的抗原基因置换为传染性支气管炎流行毒株的目的抗原基因，从而获得重组支气管炎病毒的方法，所述目的抗原基因为S基因或S1基因，所述S基因是不同血清型/基因型的传染性支气管炎流行毒株的S基因片段嵌合而成，所述置换时需保留骨架载体中原有的S1基因的信号肽区域。