[发明专利]突变型CD3及其应用

权利要求书

1.一种突变型CD3，其特征在于，所述的突变型CD3为组成CD3 ITAM功能区的疏水性氨基酸突变，所述的突变降低CD3二级结构维持所需的疏水相互作用，调整CD3二级结构构象，使得CS和CD3的相互作用减弱。

2.根据权利要求1所述的突变型CD3，其特征在于，所述的CD3选自CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ或CD3η。

3.根据权利要求1或2所述的突变型CD3，其特征在于，所述的疏水性氨基酸选自色氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸或甲硫氨酸中的一种或两种以上的组合；优选的，所述的疏水性氨基酸选自亮氨酸或异亮氨酸。

4.根据权利要求1-3任一所述的突变型CD3，其特征在于，所述的疏水性氨基酸突变为疏水性低于野生型CD3 ITAM功能区的疏水性氨基酸的氨基酸；优选的，所述的疏水氨基酸突变为缬氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C)或丙氨酸(A)。

5.根据权利要求1-4任一所述的突变型CD3，其特征在于，所述的突变型CD3为突变型CD3ε，所述的突变型CD3ε包含SEQ ID NO：1所示序列的变体，所述变体包含至少一种如下突变：

(a)第191位的异亮氨酸(I)突变为丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C)；或

(b)第202位的亮氨酸(L)突变为丙氨酸(A)、苯丙氨酸(F)、甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C)。

6.根据权利要求5所述的突变型CD3，其特征在于，所述变体包含I191A的替换。

7.一种编码权利要求1-6任一所述突变型CD3的核苷酸序列。

8.一种包含权利要求1-6任一所述突变型CD3，或者，权利要求7所述的核苷酸序列的T细胞。

9.权利要求1-6任一所述的突变型CD3、权利要求7所述的核苷酸序列或者权利要求8所述的T细胞在制备产品中的应用，其特征在于，所述的产品选自下列任一项或任两项以上的组合：

A)降低二级结构维持所需的疏水相互作用，调整CD3二级结构构象；

B)控制膜Ca²⁺滴定度；

C)抑制CD3与细胞膜的结合作用；

D)提高T细胞活性；

E)提高T细胞数量；

F)增强TCR信号；

G)增强GzmB、IFNγ、TNFα的产生；或

H)抗肿瘤。

10.一种调整CD3二级结构构象的方法，其特征在于，所述的方法包括将组成CD3ITAM功能区的疏水性氨基酸进行突变，所述的突变降低二级结构维持所需的疏水相互作用，使得CS和CD3的相互作用减弱。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的疏水性氨基酸突变为疏水性低于野生型CD3 ITAM功能区的疏水性氨基酸的氨基酸；优选的，所述的疏水氨基酸突变为缬氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C)或丙氨酸(A)。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于，所述的CD3为CD3ε，所述的方法包括将SEQ ID NO：1所示序列突变制备突变型CD3ε，所述的突变型CD3ε包含至少一种如下突变：

(a)第191位的异亮氨酸(I)突变为丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、甲硫氨酸(M)或半胱氨酸(C)；或

(b)第202位的亮氨酸(L)突变为丙氨酸(A)、苯丙氨酸(F)、甲硫氨酸(M)或半胱氨酸(C)；

且突变后降低二级结构维持所需的疏水相互作用，使得CS和CD3ε的相互作用减弱。