[发明专利]从苹小吉丁虫幼虫肠道中提取化合物吩嗪-1-羧酸的方法及应用

说明书

本发明涉及一种从苹小吉丁虫幼虫肠道中提取化合物氢吩嗪‑1‑羧酸的方法及应用，该方法从苹果小吉丁虫幼虫肠道中分离的产黄假单胞菌（Pseudomonas synxantha）在LB液体培养基当中培养，脱水，提取，加入氯仿，充分混合，离心，将上清液转移到新的烧瓶中，在通风橱中蒸发至氯仿全部挥发，取出干浸物，研磨成粉末，再将粉末经正相硅胶柱层析法和Sephadex LH‑20凝胶柱层析进行分离，即得到化合物吩嗪‑1‑羧酸；该化合物在较低浓度下5μg/mL可抑制Cytospora mali以及Cytospora parasitica两种致病病原菌，该化合物为一种假单胞菌分泌的次级代谢物，具有抑制真菌生长，可作为防治苹果腐烂病真菌剂使用。该化合物为天然成分，可自然降解，对人畜无害，施用后不对空气造成污染，具有巨大的潜在商业价值。

技术领域

本发明涉及从产黄假单胞菌Pseudomonas synxantha中提取物抗植物病原菌技术领域，具体的说，涉及一种从苹小吉丁虫肠道细菌产黄假单胞菌Pseudomonas synxantha当中提取纯化的吩嗪-1-羧酸作为抗苹果腐烂病病原菌的应用。

背景技术

农业生产中大量使用的化学杀菌剂由于缺乏相应的微生物对其进行分解，容易在自然界长期留存，造成对土壤以及地下水资源的污染。而利用从自然界中提取的天然成分作为杀菌剂，则因其易于分解、在自然界没有残留而日益受到科研界的重视。苹果腐烂病，是由黑腐皮壳属真菌C.mali侵染引起的一种毁灭性的病害，目前生产上防治苹果树腐烂病主要使用化学药剂，但是施药混乱、果农不合理、不规范地重复大量使用化学药剂，导致病原菌产生抗药性，也产生了严重的环境污染问题。在这种情况下，研发生物资源农药显得尤为重要。

吩嗪-1-羧酸，英文名，phenazine-1-carboxylicacid,PCA结构参见附图1，为一种假单胞菌分泌的次级代谢物，本发明提供一种由侵害苹果的害虫苹小吉丁虫幼虫肠道中产黄假单胞菌Pseudomonas synxantha提取的吩嗪-1-羧酸的方法。其人工合成技术的报道，参见文献(1,2)。吩嗪-1-羧酸被报道具有抑制真菌生长等作用，但是吩嗪-1-羧酸对苹果腐烂病防治作用国内外均未见报道(3-5)。

参考文献：

1.Xiong,Z.P.,J.F.Niu,H.Liu,Z.H.Xu,J.K.Li,and Q.L.Wu.2017.Synthesisand bioactivities of Phenazine-1-carboxylic acid derivatives based on themodification of PCA carboxyl group.Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters27:2010-2013.

2.Ye,L.,H.Y.Zhang,H.Xu,Q.Zou,C.Cheng,D.X.Dong,Y.Q.Xu,andR.X.Li.2010.Phenazine-1-carboxylic acid derivatives:Design,synthesis andbiological evaluation against Rhizoctonia solani Kuhn.Bioorganic&MedicinalChemistry Letters20:7369-7371.

3.Simionato AS,Navarro MOP,De JMLA,et al.The Effect of Phenazine-1-Carboxylic Acid on Mycelial Growth of Botrytis cinerea Produced byPseudomonas aeruginosa LV Strain[J].Frontiers in Microbiology,2017,8:1102-.