[发明专利]一种尿液DNA提取保存液、尿液保存管、提取试剂盒和提取方法

权利要求书

1.一种尿液DNA提取保存液，其特征在于，该保存液由以下成分构成：0.10-0.50MEDTA；20-30%甲醇；0.20-1.0%SDS；1.0-5.0%冰醋酸；余量为水；pH8.5-9.5，上述的百分比为质量百分比。

2.根据权利要求1所述的一种尿液DNA提取保存液，其特征在于，该尿液保存液包括：0.25MEDTA，25%甲醇，0.5%SDS，2%冰醋酸，pH9。

3.一种尿液保存管，其特征在于，该保存管含有权利要求1或2所述的保存液。

4.一种尿液DNA提取试剂盒，该试剂盒包括裂解液、结合液、洗涤液I、洗涤液II和洗脱液，其特征在于，该试剂盒还包括含有权利要求1或2所述的保存液的保存管。

5.根据权利要求4所述的一种尿液DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的裂解液包括0.10-0.30MTris-HCl；10-20mMEDTA；0.2-1.0MKCl；1.0-5.0MGuHCl；0.2-1.0%SDS；pH8.0-9.0，上述的百分比为质量百分比。

6.根据权利要求4所述的一种尿液DNA提取试剂盒，其特征在于，结合液选用70-90%异丙醇，pH7.0-8.0。

7.根据权利要求4所述的一种尿液DNA提取试剂盒，其特征在于，洗涤液I包括1.0-5.0MGuHCl，5-20mMTris，40-60%乙醇；pH7.5-8.5；洗涤液II包括5-20mMTris，75-85%乙醇；pH7.0-8.0。

8.根据权利要求4所述的一种尿液DNA提取试剂盒，其特征在于，洗脱液包括5-20mMTris，0.05-0.20mMEDTA；pH8.5-9.5。

9.根据权利要求4所述的一种尿液DNA提取试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

1）含有保存液的保存管，保存液：0.25MEDTA，25%甲醇，0.5%SDS，2%冰醋酸，pH9；

2）裂解液：0.2MTris-HCl，15mMEDTA，0.5MKCl，3MGuHCl,0.5%SDS，pH8.5；

3）结合液：80%异丙醇，pH7.5；

4）洗涤液I：3MGuHCl，10mMTris，50%乙醇，pH8.0；

5）洗涤液II：10mMTris，80%乙醇，pH7.5；

6）洗脱液：10mMTris，0.1mMEDTA，pH9.0。

10.一种尿液DNA提取方法，该方法采用权利要求4-9任意一项权利要求所述的试剂盒提取。

11.根据权利要求10所述的一种尿液DNA提取方法，其特征在于，该试剂盒包括：

1）含有保存液的保存管，保存液：0.25MEDTA，25%甲醇，0.5%SDS，2%冰醋酸，pH9；

2）裂解液：0.2MTris-HCl，15mMEDTA，0.5MKCl，3MGuHCl,0.5%质量百分比浓度SDS，pH8.5；

3）结合液：80%异丙醇，pH7.5；

4）洗涤液I：3MGuHCl，10mMTris，50%乙醇，pH8.0；

5）洗涤液II：10mMTris，80%乙醇，pH7.5；

6）洗脱液：10mMTris，0.1mMEDTA，pH9.0；

该方法包括以下的步骤：

1）将尿液保存管中的尿液12000rpm离心10min；

2）弃上清留沉淀；

3）沉淀中加入300μl的裂解液， 55℃震荡10min；

4）加入800μl结合液异丙醇，10μl磁珠，垂直混匀仪上混匀10min；

5）将磁珠用洗涤液I洗1次；

6）洗涤液II洗2次；

7）洗脱液洗脱，DNA溶液用于检测或-20℃保存。