[发明专利]整合有氨基酸氧化酶的大肠杆菌

权利要求书

1.一种基因工程菌，其特征在于，在大肠杆菌染色体的nupG、pitB和pgi位点上整合多个拷贝数的来自Proteus mirabilis ATCC 29906的L-氨基酸氧化酶基因；所述多个拷贝数是指在nupG位点上整合6~12个拷贝数，在pitB位点上整合6~9个拷贝数，在pgi位点上整合6~9个拷贝数。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌的宿主为E. coliBL21、E. coli JM109、E. coli DH5α或E. coli Top10。

3.根据权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，通过pET20B、pColdII、pETDuet-1或pACYCDuet-1表达所述L-氨基酸氧化酶基因。

4.一种构建权利要求1~3任一所述基因工程菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）构建氨基酸氧化酶基因整合框；所述整合框为：整合位点左臂-氨基酸氧化酶基因-整合位点右臂；所述整合位点为nupG、pitB和pgi；

（2）将步骤（1）构建的氨基酸氧化酶基因整合框转化至大肠杆菌电转感受态细胞中；所述大肠杆菌为E. coli BL21、E. coli JM109、E. coli DH5α或E. coli Top10。

5.一种全细胞催化剂，其特征在于，含有权利要求1~3任一所述基因工程菌的细胞；所述细胞是接种于培养基中，于22~30℃培养≥16 h后获得。

6.一种生产酮酸的方法，其特征在于，以L型氨基酸为底物，应用权利要求5所述的全细胞催化剂进行微生物转化；所述L型氨基酸为L-苯丙氨酸、L-色氨酸、L-DOPA、L-亮氨酸、L-蛋氨酸。

7.权利要求1~3任一所述基因工程菌在食品、生物领域参与氨基酸脱氢反应中的应用。