[发明专利]ILT4在肿瘤诊治中的应用

说明书

本发明提供ILT4在肿瘤诊治中的应用。本发明采用real‑time PCR及流式细胞术检测人肿瘤细胞株及上皮细胞株中ILT4的表达，采用免疫组化检测NSCLC及乳腺癌患者组织中ILT4的表达，并统计分析其与患者临床病理特征和总生存(OS)的相关性；分析人NSCLC、乳腺癌、前列腺癌和恶性黑色素瘤肿瘤组织中ILT4的表达与患者预后的相关性；综合论证ILT4高表达是恶性肿瘤的普遍特征，预示患者的不良预后。同时利用基因转染及敲除技术，分别上/下调ILT4低/高表达肿瘤细胞中的ILT4，通过肿瘤细胞与T细胞的共培养体系明确ILT4对T细胞老化的诱导作用，因此具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于生物医药和分子生物学技术领域，具体涉及ILT4在肿瘤诊治中的应用。

背景技术

本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

免疫球蛋白样转录子4(ILT4)，也称为淋巴细胞免疫球蛋白样受体B2(LILRB2)、单核巨噬细胞免疫球蛋白样受体10(MIR10)或CD85d，属于免疫球蛋白样转录子(ILTs)家族。该家族包括6个活化型受体成员及5个抑制性受体成员，分别以跨膜区可交链免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)的精氨酸残基及胞内区免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)为特征，向细胞内传递活化或抑制信号，调控免疫细胞的功能。ILT4是典型的Ⅰ型跨膜蛋白，由587个氨基酸组成。其胞外段含有四个免疫球蛋白样结构域，胞内含有三个ITIMs。生理条件下，ILT4主要表达于单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞(DCs)和中性粒细胞等固有免疫细胞中。当ILT4与相应的受体结合时，细胞内的ITIM可以招募含SH-2结构域的SHP-1或SHP-2磷酸酶，抑制上述细胞中活化信号的传递及免疫功能。此外，ILT4也表达于造血干细胞(HSCs)、破骨前体细胞、血小板及神经元等细胞中，能够促进HSC扩增、抑制破骨细胞发生、抑制血小板聚集及神经轴突再生[25]。ILT4在小鼠中的同源蛋白为配对的免疫球蛋白样受体-B(PIR-B)，其胞外段含有六个免疫球蛋白样结构域，胞内含有四个ITIMs。PIR-B主要表达于B细胞、DCs、粒细胞及巨噬细胞等免疫细胞中，抑制上述细胞的活化与免疫功能。

近年来，ILT4在肿瘤微环境中的表达越来越引起人们的重视。目前大量研究证实，ILT4在多种血液及实体肿瘤的肿瘤细胞中高表达，与患者的疾病进展及不良生存相关，是患者的阴性预后指标。此外，ILT4/PIR-B在间质的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)及髓源性抑制细胞(MDSCs)高表达，促使其向免疫抑制的M2表型极化，诱导了调节性T细胞(Treg)的分化，进而促进肿瘤免疫逃逸。但是肿瘤源性ILT4对肿瘤浸润T细胞命运及功能的直接调控作用尚不清楚。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明的目的在于提供免疫球蛋白样转录子4(ILT4)在肿瘤诊治中的应用。本申请采用real-time PCR及流式细胞术检测人肿瘤细胞株及上皮细胞株中ILT4的表达，采用免疫组化检测NSCLC及乳腺癌患者(肿瘤)组织中ILT4的表达，并统计分析其与患者临床病理特征和总生存(OS)的相关性；通过GEO数据库分析人NSCLC、乳腺癌、前列腺癌和恶性黑色素瘤肿瘤组织中ILT4的表达与患者预后的相关性；综合论证ILT4高表达是恶性肿瘤的普遍特征，预示患者的不良预后。同时利用基因转染及敲除技术，分别上/下调ILT4低/高表达肿瘤细胞中的ILT4，通过肿瘤细胞与T细胞的共培养体系明确ILT4对T细胞老化的诱导作用，从而完成本发明。

本发明的第一个方面，提供检测ILT4基因及其表达产物表达水平的物质在制备检测、诊断或预测肿瘤进展试剂中的应用。

所述肿瘤包括但不限于肺鳞癌、肺腺癌、乳腺癌、恶性黑色素瘤及前列腺癌。

根据试验证明，ILT4表达量增高与肿瘤严重程度及不良预后有关，具体表现为正相关。