[发明专利]与呕吐毒素特异性结合的核酸适配体、制备方法及应用在审
| 申请号： | 201911170367.7 | 申请日： | 2019-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN110923238A | 公开（公告）日： | 2020-03-27 |
| 发明（设计）人： | 韩芹芹;秦鸣蔚;夏雪山;张晓萌;宋玉竹;张金阳 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/115 | 分类号： | C12N15/115;C12N15/10;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京众泽信达知识产权代理事务所(普通合伙) 11701 | 代理人： | 张艳萍 |
| 地址： | 650500 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 呕吐 毒素 特异性 结合 核酸 适配体 制备 方法 应用 | ||
1.与呕吐毒素特异性结合的核酸适配体，其特征在于，所述与呕吐毒素特异性结合的核酸适配体核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.如权利要求1所述的与呕吐毒素特异性结合的核酸适配体，其特征在于，所述与呕吐毒素特异性结合的核酸适配体的二级结构具有突出的环和茎，吉布斯自由能DG＝-8.96。
3.如权利要求1所述的与呕吐毒素特异性结合的核酸适配体，其特征在于，该适配体对应引物包括AptamerFw和Aptamer Rv，其中AptamerFw的序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3，Aptamer Rv的序列如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5。
4.与呕吐毒素特异性结合的核酸适配体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
步骤一、筛选，采用SELEX技术筛选出能够与呕吐毒素特异性结合的核酸适配体群体；
步骤二、挑取单克隆，设计引物进行PCR扩增、挑取单克隆，利用PMD 19-T载体将PCR产物连接转化到感受态细胞中，将连接转化好的感受态细胞划线在带有氨苄的培养基平板上，37℃过夜；
步骤三、分离，利用划线法将大量的核酸进行分离，经过摇菌得到我们所需要的单个核酸，得到适配体DON A16。
5.与呕吐毒素特异性结合的核酸适配体的应用，其特征在于，与呕吐毒素特异性结合的核酸适配体可用于直接检测呕吐毒素的试剂盒中。
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