[发明专利]一种用于检测小而密低密度脂蛋白胆固醇的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明属于低密度脂蛋白胆固醇检测技术领域，具体涉及一种用于检测小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其检测方法。该试剂盒至少包含用于清除样品中除sd‑LDL‑C以外的脂蛋白的试剂组合物(1)和仅与sd‑LDL‑C反应的试剂组合物(2)；所述试剂组合物(1)包括嵌合酯酶和镁基类离子液体。本发明提供的是一种特异性较高的用于小而密低密度脂蛋白胆固醇检测的试剂盒。用本发明所述试剂盒在检测时可特异地清除sd‑LDL以外的脂蛋白，提高了试剂盒的检测结果的准确度。而且该试剂盒操作简单，可以应用于目前广泛使用的临床生化自动分析仪，从而达到大规模测定样本的要求。

技术领域

本发明属于低密度脂蛋白胆固醇检测技术领域，具体涉及一种用于检测小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

低密度脂蛋白胆固醇(LDL)是一种球形颗粒的脂蛋白，直径为22nm，核心是1500个胆固醇酯；外面由800个磷脂和500个未酯化的胆固醇分子包裹。根据密度不同，用密度梯度超速离心法(Metabolism,2001:983-988.)可以将LDL分为7种亚型：LDL-1和LDL-2为大而轻LDL(Large-buoyant LDL,lb-LDL)；LDL-3和LDL-4为中间密度LDL(intermediate-denseLDL,id-LDL)；LDL-5、LDL-6和LDL-7为小而密LDL(small-dense LDL,sd-LDL)。已有的研究表明，sd-LDL的增加是动脉硬化的主要危险因素之一，与普通LDL相比，其致动脉粥样硬化能力更强，与冠心病的关系更为密切，因此开展对sd-LDL的常规检测是非常必要的。

已知的sd-LDL检测方法主要有超速离心法、分级沉淀法、电泳法、高效液相色谱法等，这些方法步骤繁琐、自动化程度低，难以在临床常规开展。应用于全自动生化分析仪的酶法检测试剂盒近年来得到了开发和应用，这一类试剂盒的基本检测原理，是在低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂的基础上，进一步清除LDL-C中除sd-LDL-C以外的脂蛋白胆固醇，从而实现对剩余的sd-LDL-C直接测定，即：第一步，首先清除LDL-C以外的脂蛋白胆固醇，并进一步清除LDL-C中除sd-LDL-C以外的脂蛋白胆固醇；第二步，用胆固醇测定试剂对剩余的sd-LDL-C进行定量测定。上述步骤中，第一步是此方法的核心步骤，该步骤中，作为“首先清除LDL-C以外的脂蛋白胆固醇”的方法，已有文献和专利资料进行了公开，如文献“Low-density lipoprotein cholesterol can be chemically measured a newsuperior method.(J Lab Clin Med,1998:195-201.)”和专利“低密度脂蛋白中胆固醇的定量方法(ZL 97182112.7，已失效)”公开了表面活性剂的种类及HLB值与各脂蛋白组分反应度之间的关系。作为“进一步清除LDL-C中sd-LDL-C以外的脂蛋白胆固醇”的方法，专利“用于定量测定小而密LDL的试剂(ZL 200880013083.0)”通过严格控制胆固醇酯酶活性和在0.05g/L-1.0g/L的表面活性剂的存在下消除试样中除sd-LDL-C以外的脂蛋白胆固醇，然而，由于胆固醇酯酶和表面活性剂的非特异性，此方法的特异性是不令人满意的。作为一种方法的改进，文献“Development of a Homogeneous Assay for Measurement of SmallDense LDL Cholesterol.(Clinical Chemistry,2011:57–65.)”和专利“定量测定小而密LDL胆固醇的方法和试剂盒(ZL 201410058250.0)”更进一步在第一步反应中引入了磷脂酶，使其作用于LDL分级中的lb-LDL亚组分，旨在磷脂酶存在下清除小而密LDL之外的LDL中的胆固醇，然而研究发现，对于存在着lb-LDL、id-LDL、sd-LDL三个亚组分的LDL而言，仅相对特异地清除掉lb-LDL亚组分，使得此法依然存在着特异性不高的可能。公开的资料表明，该法与作为参考方法的sd-LDL-C沉淀法的相关系数r值均小于0.95，进一步提示了该方法存在特异性不高的可能。