[发明专利]一种发酵生产辛伐他汀合成用酰化酶的方法在审
| 申请号： | 201911171308.1 | 申请日： | 2019-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN110684758A | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 史磊;申洋;陈东;朱维忠 | 申请（专利权）人： | 山东鲁抗医药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/80 | 分类号： | C12N9/80;C12R1/19 |
| 代理公司： | 11569 北京高沃律师事务所 | 代理人： | 董大媛 |
| 地址： | 272000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 发酵液 发酵 发酵工程技术 重组大肠杆菌 发酵培养基 酶活力单位 种子液接种 产量稳定 发酵周期 固液分离 菌体发酵 上清酶液 收集菌体 辛伐他汀 酰化酶 均质 菌体 絮凝 重悬 生产 | ||
1.一种发酵生产辛伐他汀合成酰化酶的方法，包括以下步骤：
1)将重组大肠杆菌CH39807种子液接种至发酵培养基中36～38℃进行菌体发酵；
2)当发酵液的OD600值为20～35时，开始对发酵液进行降温，降温至25℃，当所述发酵液的温度≤30℃时，加入IPTG诱导表达10～12h后，收集菌体；
3)重悬收集到的菌体，进行均质、絮凝、固液分离，收集上清酶液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的发酵培养基，以水为溶剂，每10L包括以下质量的组分：十二水合磷酸氢二钠160～190g、磷酸二氢钾60～80g、氯化铵45～60g、硫酸钠10～20g、七水合硫酸镁8～15g、蛋白胨90～110g、酵母粉40～60g、甘油90～110g、消泡剂3～8mL和三氯化铁0.1～0.6g。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述重组大肠杆菌CH39807种子液的接种量为4％～6％，所述重组大肠杆菌CH39807种子液的OD600为1.0～1.4。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述菌体发酵的溶氧量控制在20％以上。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的菌体发酵过程的pH值控制在5.9～6.5。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的菌体发酵过程中补加葡萄糖溶液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中当发酵液的OD600值为30～32时，开始对发酵液进行降温。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述IPTG在发酵体系中的终浓度为0.08～0.12mmol/L。
9.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述诱导表达过程中的pH值为6.9～7.2。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述均质的压力为700～800bar，所述均质的温度为4～6℃，所述均质的次数为1～3次。
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