[发明专利]一种碱性底物选择性提高的枯草蛋白酶E突变体及其应用有效
| 申请号： | 201911171949.7 | 申请日： | 2019-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN112852788B | 公开（公告）日： | 2022-10-11 |
| 发明（设计）人： | 张娟;汤恒;堵国成;陈坚 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/56 | 分类号： | C12N9/56;C12N15/57;C12N15/70;C12N1/21;A23L29/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 碱性 选择性 提高 枯草 蛋白酶 突变体 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种枯草芽孢杆菌蛋白酶E突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。
2.编码权利要求1所述的枯草芽孢杆菌蛋白酶E突变体的基因。
3.含有权利要求2所述基因的重组质粒载体。
4.如权利要求3所述的重组质粒载体，其特征在于，所述重组质粒载体是在pET系列、pGEX系列、pPICZ系列、pAN系列或pUB中的任意一种质粒的基础上构建得到的。
5.表达权利要求1所述的枯草芽孢杆菌蛋白酶E突变体的基因工程菌。
6.一种增强枯草芽孢杆菌蛋白酶E碱性底物选择性的方法，其特征在于，是在SEQ IDNO. 1所示的氨基酸序列的基础上，将第127-132位的环序列GGPSGS突变为YDADDS，第158-162位的环序列SSGSS突变为QHPKEG。
7.一种生产枯草芽孢杆菌蛋白酶E的方法，其特征在于，是培养权利要求5所述的基因工程菌，诱导表达获得枯草芽孢杆菌蛋白酶E。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，将权利要求5所述的基因工程菌在LB培养基中，35-39℃温度下培养8-14 h，得到种子液；按1-10 %接种量将种子液接到LB液体培养基，在35-39℃，200-220 rpm培养至OD600为0.9-1.1，加入IPTG，于15-17 oC诱导培养12-16 h。
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