[发明专利]一种猪瘟的快速检测方法

权利要求书

1.一种猪瘟的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，破碎研磨：取待测猪组织样品，充分剪碎后置于乳锅中研磨，随后加入5-8倍体积的PBS溶液，搅拌混合后，得到乳液；

步骤二，离心过滤：将乳液移入离心管中进行离心，然后取离心管中上层清液，过滤膜除菌后得到无菌滤液；

步骤三，沉淀除杂：将无菌滤液加入容器中，并加入由三氯乙酸、醋酸锌、亚铁氰化钾混合而成的沉淀助剂，超声振荡，静置分层，除去沉淀，将剩余液体在无菌离心管中进行离心脱脂，除去脂肪层，得到浸出液；

步骤四，接种培养：将浸出液接种于长成单层的PK15细胞，35-40℃下吸附1.5-2h后，加入含有2-3%胎牛血清的DMEM维持液，培养24-72h，得到检样；

步骤五，荧光抗体染色：在检样中加FITC标记的抗CSFV多抗，在35-40℃下温育1-1.5h，用PBS溶液冲洗后，取洁净玻片用封片液封片，得到标样；

步骤六，观察对比：设正常PK-15细胞为阴性对照，设接种CSFV石门株病毒的PK-15细胞为阳性对照，然后将标样在荧光倒置显微镜下观察，对照后得到检测结果；

所述步骤三中，沉淀助剂中三氯乙酸、醋酸锌、亚铁氰化钾的质量混合比为(2-6):1:(3-5)。

2.根据权利要求1所述的猪瘟的快速检测方法，其特征在于，所述步骤三中，沉淀助剂中三氯乙酸、醋酸锌、亚铁氰化钾的质量混合比为6:1:4。

3.根据权利要求1所述的猪瘟的快速检测方法，其特征在于，所述步骤二中，离心速度为12000-14000rpm，离心时间为8-10min，且离心温度设置为3-4℃。

4.根据权利要求1所述的猪瘟的快速检测方法，其特征在于，所述步骤二中，过滤膜的孔径大小为0.2-0.24μm。

5.根据权利要求1所述的猪瘟的快速检测方法，其特征在于，所述步骤三中，沉淀助剂和无菌滤液的体积比为（3-5）:1。

6.根据权利要求1所述的猪瘟的快速检测方法，其特征在于，所述步骤三中，沉淀助剂和无菌滤液的体积比为4:1。

7.根据权利要求1所述的猪瘟的快速检测方法，其特征在于，所述步骤三中，离心脱脂过程中，依次控制离心转速为3000-5000rpm、6000-9000rpm、12000-15000rpm，分别控制时间为5-10min、12-16min、18-20min。

8.根据权利要求1所述的猪瘟的快速检测方法，其特征在于，所述步骤一和步骤五中，PBS溶液的浓度为0.01-0.02mol/L，pH值为7-7.5。